發(fā)布時間：2023-03-19 06:19

　　本研究的目的是克隆白花泡桐纖維素生物合成途徑關鍵酶基因——纖維素合成酶家族基因。采用PCR和RACE技術,利用Oligo、Primer Premier 5等軟件進行引物設計,從白花泡桐中克隆出纖維素合成酶基因一條,NCBI分析后,命名為PfCesA4 (NCBI登錄號:MK340936)。PfCesA4基因的cDNA全長為3 735 bp,其開放閱讀框(ORF)長度為3 138 bp,能夠編碼含有1 045個氨基酸的蛋白質,此蛋白質的相對分子質量為119 081.91 u,等電點為7.24。二級結構分析表明其以α-螺旋和無規(guī)則卷曲為主。結構域和跨膜區(qū)分析表明其在N端含有鋅指結構域及2個跨膜區(qū),在C端含有6個跨膜區(qū),這些結構域能夠表現(xiàn)纖維素合成酶的特征。系統(tǒng)進化樹分析表明在所選取的物種當中,白花泡桐與芝麻的親緣關系較近。組織特異性分析結果表明,其在莖中的表達量最高,根部次之,葉部最少;且在莖中,木質部的表達量高于韌皮部,說明其可能主要參與次生壁的建成。通過對PfCesA4基因的克隆及分析,能夠為泡桐纖維素生物合成途徑及后期利用分子手段對泡桐木材進行遺傳改良提供基因資源。

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 結果與分析
    1.1 克隆獲得PfCesA4基因中間片段
    1.2 擴增獲得白花泡桐PfCesA4基因兩端序列
    1.3 白花泡桐PfCesA4基因為一條完整的基因
    1.4 白花泡桐PfCesA4基因生物信息學分析
        1.4.1 白花泡桐Pf CesA4蛋白一級結構、二級結構及其他理化性質分析
        1.4.2 白花泡桐Pf CesA4蛋白結構域及跨膜區(qū)分析
        1.4.3 系統(tǒng)發(fā)育樹聚為兩類
    1.5 白花泡桐PfCesA4基因組織特異性表達分析
2 討論
3 材料與方法
    3.1 試驗材料
    3.2 白花泡桐總RNA的提取及反轉錄
    3.3 白花泡桐PfCesA4基因中間序列克隆
    3.4 RACE引物設計及cDNA獲取
    3.5 利用5'RACE和3'RACE技術擴增PfCesA4基因的兩端序列
    3.6 白花泡桐PfCesA4基因開放閱讀框的克隆
    3.7 序列及生物信息學分析
    3.8 PfCesA4基因組織特異性表達分析
作者貢獻



本文編號：3764734