為深入了解天然橡膠次生代謝生物合成過程,本研究從橡膠樹膠乳中分離得到一個(gè)橡膠轉(zhuǎn)移酶激活因子基因HbRTA,并對其進(jìn)行了克隆、表達(dá)、定位以及生物學(xué)分析。結(jié)果表明,HbRTA的基因組序列為3 632 bp,含有7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子,其開放閱讀框（ORF）為774 bp,編碼蛋白含257個(gè)氨基酸,分子量為29.38 kD,理論等電點(diǎn)為8.57。酵母實(shí)驗(yàn)及亞細(xì)胞定位表明,HbRTA蛋白沒有轉(zhuǎn)錄激活活性,且定位在細(xì)胞質(zhì)中。實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析發(fā)現(xiàn),HbRTA在葉片、雌花、雄花、膠乳、樹皮中均表達(dá),其中膠乳表達(dá)量高于其它組織,并且膠乳中該基因的表達(dá)受割膠、茉莉酸（JA）和乙烯利（ET）刺激的影響。綜合分析結(jié)果推測:HbRTA的表達(dá)可能與巴西橡膠樹橡膠生物合成及膠乳產(chǎn)量有關(guān)。 

【文章來源】：分子植物育種. 2020,18(23)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

Hb RTA基因的核苷酸序列和推測氨基酸序列

圖3 橡膠樹Hb RTA蛋白與其他植物同源蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹采用SOPMA (http://pbil.ibcp.fr/)軟件對Hb RTA蛋白進(jìn)行二級(jí)結(jié)構(gòu)在線預(yù)測，結(jié)果顯示該蛋白有136個(gè)α-螺旋(α-helix)、29個(gè)延伸帶(Extended strand)、11個(gè)β轉(zhuǎn)變(β-turn)、81個(gè)無規(guī)則卷曲構(gòu)成，占比分別為α-螺旋(52.92%)、延伸帶(11.28%)、β轉(zhuǎn)變(4.28%)、無規(guī)則卷曲(31.52%)。通過SWISS-MO-DEL軟件在線分析其二級(jí)結(jié)構(gòu)(圖4 B)，所得結(jié)果與二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測基本一致，進(jìn)一步驗(yàn)證了Hb RTA結(jié)構(gòu)的正確性。

酵母實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：已轉(zhuǎn)入陽性對照Hb NAC24轉(zhuǎn)錄因子、p GBKT7-Hb RTA以及陰性對照p GBKT7質(zhì)粒的酵母Y2HGold均能在缺陷培養(yǎng)基SD/-Trp上生長，表明成功構(gòu)建誘餌表達(dá)載體，質(zhì)粒已經(jīng)順利轉(zhuǎn)入Y2HGold酵母感受態(tài)細(xì)胞中。攜帶p GBKT7-HbRTA和陰性對照p GBKT7質(zhì)粒的酵母Y2HGold在三缺培養(yǎng)基SD/-Trp/-Ade/-His上不能正常生長，而陽性對照攜帶Hb NAC24轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒的酵母能夠正常生長并且變藍(lán)(圖6)，表明Hb RTA編碼的蛋白沒有自激活活性。1.5 Hb RTA基因的表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]巴西橡膠樹橡膠生物合成關(guān)鍵基因REF,SRPP,HRT1和HRT2的表達(dá)分析[J]. 王藝航,康桂娟,黎瑜,覃懷德,曾日中.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2018(09)
[2]我國天然橡膠產(chǎn)業(yè)發(fā)展概況及現(xiàn)狀分析[J]. 金華斌,田維敏,史敏晶.  熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(05)
[3]巴西橡膠樹HbNAC24基因克隆和表達(dá)分析[J]. 康桂娟,黎瑜,曾日中.  西北植物學(xué)報(bào). 2014(12)
[4]應(yīng)用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選橡膠延長因子REF的互作蛋白[J]. 曾日中,李先昆,聶智毅,代龍軍,黎瑜,段翠芳.  熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào). 2011(05)
[5]一種提取橡膠樹葉中總DNA的方法[J]. 安澤偉,黃華.  植物生理學(xué)通訊. 2005(04)

碩士論文
[1]巴西橡膠樹小橡膠粒子蛋白SRPP互作蛋白的研究[D]. 王藝航.海南大學(xué) 2018
[2]橡膠樹橡膠延伸因子HbREF3的基因克隆與表達(dá)研究[D]. 孫麗娜.海南大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3587170