松花粉是指松科植物馬尾松、油松或同屬數(shù)種植物的干燥花粉,但不同樹(shù)種來(lái)源的松花粉在活性成分的含量上有所差別。因此,準(zhǔn)確鑒定松花粉的樹(shù)種來(lái)源對(duì)保證松花粉產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性、規(guī)范松花粉市場(chǎng)具有重要意義。針對(duì)傳統(tǒng)性狀及化學(xué)法在檢測(cè)松花粉原料的樹(shù)種來(lái)源上的局限性,通過(guò)比較不同松樹(shù)樹(shù)種的葉綠體基因組序列,在accD基因中挖掘了馬尾松和云南松的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)。根據(jù)其特異性位點(diǎn),通過(guò)人為引入錯(cuò)配堿基的方式分別設(shè)計(jì)了馬尾松和云南松的特異性引物,并利用多重PCR對(duì)不同松樹(shù)的花粉進(jìn)行了鑒定。除了松樹(shù)的特征性條帶外,馬尾松和云南松的花粉樣品還分別產(chǎn)生了168 bp和342 bp的特異性條帶。實(shí)驗(yàn)建立的多重PCR方法不僅可以將活性成分含量較高的馬尾松、云南松的花粉與其他松樹(shù)花粉及混淆品蒲黃區(qū)分,而且可以鑒定市售松花粉產(chǎn)品的原料來(lái)源。結(jié)果表明,采用葉綠體基因可以對(duì)花粉的DNA進(jìn)行擴(kuò)增并實(shí)現(xiàn)對(duì)花粉來(lái)源的鑒定。該方法可以作為松花粉原料來(lái)源的鑒定體系,保證松花粉產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性,也為松花粉及產(chǎn)品質(zhì)量的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的完善和補(bǔ)充提供了新的DNA分子標(biāo)記手段。 

【文章來(lái)源】：食品科技. 2020,45(08)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

不同松樹(shù)花粉葉綠體acc D基因序列的比對(duì)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)所用引物的相對(duì)位置圖

以PmF、PyF和PaF為正向引物,以PaR為反向引物,以1.3.4所述的反應(yīng)條件對(duì)不同松樹(shù)花粉的模板DNA進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物的凝膠成像結(jié)果如圖3所示。所有的松花粉樣品(泳道1～14)均產(chǎn)生了由PaF和PaR擴(kuò)增出的長(zhǎng)度為454 bp的共有條帶,而松花粉的混淆品蒲黃(泳道15)則沒(méi)有條帶產(chǎn)生。而馬尾松的花粉樣品(泳道1～3)還同時(shí)產(chǎn)生了由PmF和PaR結(jié)合擴(kuò)增出的長(zhǎng)度為168 bp的特異性條帶,云南松的花粉樣品(泳道4～6)則同時(shí)產(chǎn)生了由PyF和PaR結(jié)合擴(kuò)增出的長(zhǎng)度為342 bp的特異性條帶。油松(泳道7～8)、黑松(泳道9～10)、赤松(泳道11～12)的花粉樣品除了454 bp的共有條帶外,均未有特異性條帶產(chǎn)生。這說(shuō)明實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的馬尾松和云南松花粉的品種特異性引物在所述的反應(yīng)條件下分別對(duì)各自的目標(biāo)樹(shù)種具有高度的特異性。市售的2種松花粉樣品中,一種花粉樣品產(chǎn)生了3條帶,另一種則產(chǎn)生了1條帶。這說(shuō)明市售的松花粉樣品的原料來(lái)源混雜,并未對(duì)原料按樹(shù)種來(lái)源進(jìn)行區(qū)分。將圖3中馬尾松和云南松的特異性條帶分別切膠回收并進(jìn)行克隆測(cè)序,測(cè)序獲得的序列與圖1的序列比對(duì)結(jié)果完全一致。對(duì)采集的大量花粉及松針樣品進(jìn)行了測(cè)試,實(shí)驗(yàn)結(jié)果與圖3完全一致。因此,實(shí)驗(yàn)建立的多重PCR方法不僅可以將活性成分含量較高的馬尾松、云南松的花粉與其他松樹(shù)樹(shù)種的花粉進(jìn)行區(qū)分,而且可以通過(guò)其特異性條帶準(zhǔn)確鑒定出馬尾松和云南松的花粉。3 討論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3509545