利用PCR技術(shù)從毛果楊(Populus trichocarpa)中分離得到1條絲氨酸蛋白酶抑制劑基因PtrSPI,該基因cDNA編碼區(qū)全長為1 176 bp,可編碼391個(gè)氨基酸。BlastP預(yù)測(cè)結(jié)果顯示,該絲氨酸蛋白酶抑制劑屬于SERPIN超家族。多序列比對(duì)結(jié)果表明,毛果楊PtrSPI基因的氨基酸序列與已報(bào)道的胡楊(P.euphratica)絲氨酸蛋白酶抑制劑氨基酸序列XP₀11030699同源性最高,相似性為92%,且蛋白的C端氨基酸序列都含有高度保守的反應(yīng)中心環(huán)(RCL)。在此基礎(chǔ)上,成功構(gòu)建了PtrSPI基因的重組真核表達(dá)載體pPICK-PtrSPI并獲得了重組畢赤酵母菌株GS115-PtrSPI。利用終質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%甲醇誘導(dǎo)重組真核蛋白表達(dá),SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示,在42648.45處出現(xiàn)了重組蛋白,與預(yù)期值一致。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 毛果楊PtrSPI基因的克隆與序列分析
    1.3 毛果楊PtrSPI基因真核表達(dá)載體構(gòu)建
    1.4 重組表達(dá)載體pPIC9K-PtrSPI轉(zhuǎn)化畢赤酵母及其轉(zhuǎn)化子篩選
    1.5 真核重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
2 結(jié)果與分析
    2.1 毛果楊PtrSPI基因全長cDNA獲得與生物信息學(xué)
    2.2 毛果楊PtrSPI多序列比對(duì)及進(jìn)化樹分析
    2.3 毛果楊PtrSPI基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.4 畢赤酵母轉(zhuǎn)化子的篩選與鑒定
    2.5 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
3 結(jié)論與討論



本文編號(hào)：3960879