為調(diào)查廣東省國蘭病毒病發(fā)生情況,采用雙抗體夾心-酶聯(lián)免疫吸附測定(double sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)法對采集自廣州市、汕頭市和韶關(guān)市蘭花主產(chǎn)區(qū)的53份具有典型病毒病癥狀的國蘭葉片進行檢測,選取35份病葉應(yīng)用RT-PCR技術(shù)對檢測結(jié)果進行驗證,并基于cp基因序列對檢測到的病毒進行系統(tǒng)進化分析。DAS-ELISA檢測結(jié)果顯示,53份病葉中有44份檢出病毒,總檢出率為83.02%;其中,有14份僅檢出建蘭花葉病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV),有19份僅檢出齒蘭環(huán)斑病毒(Odontolossum ring spot virus,ORSV),有11份檢出CymMV和ORSV復(fù)合侵染,檢出率分別為26.42%、35.85%和20.75%。RT-PCR檢測結(jié)果顯示,35份病葉中有30份檢出病毒,總檢出率為85.71%;其中,有21份僅檢出CymMV,有6份僅檢出ORSV,有4份檢出CymMV和ORSV復(fù)合侵染,檢出率分別為60.00%、17.14%和11.43%,但未檢測到其它病毒。...

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【部分圖文】：

圖1采集的疑似感染病毒病國蘭代表性葉片

供試植物：本氏煙草Nicotianabenthamiana由本實驗室保存并提供，于16h光照（25℃）/8h黑暗（20℃）、相對濕度50%～80%的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。健康的無病毒國蘭葉片采集自廣東省農(nóng)業(yè)科學院環(huán)境園藝研究所蘭花種質(zhì)資源圃組培脫毒苗。試劑：DAS-ELISA試劑盒....

圖3基于CP氨基酸序列以鄰接法構(gòu)建CymMV各分離物的系統(tǒng)進化樹

系統(tǒng)進化分析顯示，35個CymMV分離物可聚類為3個類群Ⅲ、Ⅲ和Ⅲ（圖3）。類群Ⅲ又可分為亞群A和B，本研究獲得的CymMV分離物ZC29與新加坡、日本、韓國、印度和中國的CymMV分離物聚類于亞群A；另外4個CymMV分離物ZC17、ZC23、GZV013和GZV015的親緣關(guān)....

圖2廣東省國蘭病樣中CymMV和ORSV的RT-PCR檢測結(jié)果

選取35份疑似病樣進行CymMV、ORSV、CMV、CaCV和BaRMV的RT-PCR檢測，結(jié)果顯示，除CymMV和ORSV外，未檢測到其它病毒。35份樣品中擴增出與CymMV目標片段一致的780bp特異性條帶的樣品有25個，包括ST-6、ZC-30、ZC-29、ZC-28、Z....

圖4基于CP氨基酸序列以鄰接法構(gòu)建ORSV各分離物的系統(tǒng)進化樹

系統(tǒng)進化分析結(jié)果顯示，43個ORSV分離物可聚類為2個類群Ⅲ和Ⅲ（圖4）。本研究的6個ORSV分離物WY002、GZV009、GZV005、GZV006、WY003和ZC005與來自中國、韓國、印度尼西亞和德國等國家的ORSV分離物被聚類在Ⅲ類群，且Ⅲ類群中ORSV分離物的寄主包....

本文編號：3906570