【背景】柑橘潰瘍病(citrus bacterial canker,CBC)是世界柑橘產(chǎn)業(yè)上危害最嚴(yán)重的病害之一,由柑橘黃單胞桿菌柑橘亞種(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)引起,在國內(nèi)外被列為檢疫對象。由于柑橘分子病理研究相對滯后,導(dǎo)致可供利用的抗性基因資源相對匱乏。WRKY轉(zhuǎn)錄因子參與植物抵御生物和非生物脅迫反應(yīng),前期研究發(fā)現(xiàn)柑橘WRKY轉(zhuǎn)錄因子可能在調(diào)控寄主抗病反應(yīng)中起著重要作用。【目的】通過對超量表達CsWRKY50、CsWRKY61和CsWRKY72轉(zhuǎn)基因晚錦橙(Citrus sinensis)的潰瘍病抗性進行評價,明確這些基因在柑橘響應(yīng)潰瘍病菌侵染中的生物學(xué)功能和抗病育種價值。進一步利用RNA-Seq解析CsWRKY61調(diào)控的信號通路。【方法】利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進行柑橘遺傳轉(zhuǎn)化,獲得超量表達CsWRKY50、CsWRKY61和CsWRKY72的晚錦橙;利用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)分析轉(zhuǎn)基因植株中目的基因的表達水平以及拷貝數(shù);以非轉(zhuǎn)基因植株為對照,采用離體針刺接種評價轉(zhuǎn)基因植株對潰瘍病的抗性;通過比較超量表達CsWRKY61和野生...

【文章頁數(shù)】：16 頁

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
    1.2 植物表達載體的構(gòu)建
    1.3 柑橘遺傳轉(zhuǎn)化
    1.4 GUS組織化學(xué)染色
    1.5 轉(zhuǎn)基因植株P(guān)CR鑒定
    1.6 外源基因拷貝數(shù)的實時熒光定量PCR(q RT-PCR）分析
    1.7 目的基因表達水平的實時熒光定量PCR分析
    1.8 轉(zhuǎn)基因植株的潰瘍病抗性評價
    1.9 轉(zhuǎn)錄組測序分析
    1.1 0 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
    2.1 超量表達Cs WRKY50、CsWRKY61和CsWRKY72晚錦橙植株的獲得
    2.2 轉(zhuǎn)基因植株外源基因拷貝數(shù)及目的基因表達水平
    2.3 轉(zhuǎn)基因植株潰瘍病抗性評價
    2.4 超量表達Cs WRKY61對植株表達譜的影響
3 討論
4 結(jié)論



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