【背景】防御假單胞菌（Pseudomonas protegens） H78是分離于油菜根際的一株生防菌,其能合成藤黃綠菌素（pyoluteorin,Plt）等多種廣譜抗生素,H78的rsmA/E雙突變體中Plt合成被完全抑制�！灸康摹客ㄟ^轉(zhuǎn)座子誘變技術(shù),篩選H78ΔrsmA/E雙突變體中重新激活Plt合成的下游調(diào)控因子�！痉椒ā客ㄟ^同源重組的方法在pltL基因下游插入紅色熒光蛋白（redfluorescentprotein,RFP）基因來指示Plt操縱子表達(dá)的激活情況;利用轉(zhuǎn)座子隨機(jī)插入突變、半隨機(jī)PCR技術(shù)篩選并定位目標(biāo)基因;通過基因回補(bǔ)等方法進(jìn)一步驗(yàn)證基因功能�！窘Y(jié)果】從約2萬株H78ΔrsmA/E的轉(zhuǎn)座子突變體中篩選到一株高產(chǎn)Plt和某種黑色素的菌株,并確定其插入位點(diǎn)為hmgA基因,hmgA基因回補(bǔ)能重新抑制H78ΔrsmA/E的Plt合成�！窘Y(jié)論】假單胞菌雙突變體H78ΔrsmA/E中hmgA基因?qū)lt的合成存在強(qiáng)烈抑制作用,是潛在的RsmA/E下游調(diào)控基因。本研究為進(jìn)一步闡明Plt合成的調(diào)控機(jī)制與網(wǎng)絡(luò)及通過基因工程提高Plt產(chǎn)量奠定了基礎(chǔ)。 

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒及引物
        1.1.2 菌株培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件
        1.1.3 主要試劑和儀器
    1.2 構(gòu)建指示菌株
    1.3 轉(zhuǎn)座子插入突變篩選
    1.4 確定轉(zhuǎn)座子插入突變位點(diǎn)
    1.5 hmgA基因過表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
2 結(jié)果與分析
    2.1 指示菌株H78ΔrsmA/E-RFP的構(gòu)建及驗(yàn)證
    2.2 在H78ΔrsmA/E中進(jìn)行轉(zhuǎn)座子誘變篩選并確定轉(zhuǎn)座子插入位點(diǎn)
    2.3 hmgA基因的過表達(dá)對H78ΔrsmA/E-TM1中Plt生物合成的影響
3 討論與結(jié)論



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