【目的】構建霜霉菌侵染后葡萄葉片的酵母雙雜交cDNA文庫,篩選致病因子在寄主葡萄體內的互作靶標,為葡萄霜霉病菌致病的分子機理研究提供材料基礎�！痉椒ā恳砸荒晟鷼W亞種葡萄西拉盆栽苗為試驗材料,提取并等量混合霜霉菌侵染后0、12、18、24和36 h的葡萄葉片總RNA,利用基于Gateway技術的CloneMiner Ⅱ cDNA文庫構建試劑盒:首先將cDNA與pDONR222載體進行BP重組反應連接,連接產物轉化大腸桿菌DH10B感受態(tài)細胞構建初級文庫;然后初級文庫質粒與pGADT7-DEST載體通過LR重組反應,重組反應產物轉化大腸桿菌DH10B感受態(tài)細胞構建次級文庫;再隨機挑取次級文庫轉化Y187酵母菌株構建酵母雙雜交cDNA文庫;最后利用ImageJ軟件和PCR反應分別統(tǒng)計庫容量和鑒定重組率�！窘Y果】構建的初級文庫庫容量為4.6×10~7CFU,次級文庫庫容量為2.7×10~7CFU,均達到構建cDNA文庫的標準。酵母雙雜交cDNA文庫的插入片段主要集中在1000～2000 bp,且具有很好的多態(tài)性,文庫質量較高。【結論】構建的霜霉菌誘導葡萄葉片酵母雙雜交cDNA文庫符合酵母雙雜交... 

【文章頁數】：7 頁

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
    1.2 試驗方法
        1.2.1 霜霉菌侵染
        1.2.2 RNA提取、反轉錄
        1.2.3 初級文庫（Uncut型）構建及保存
        1.2.4次級文庫構建及保存
        1.2.5 酵母雙雜交cDNA文庫質量鑒定
        1.2.6 菌落計數方法
2 結果與分析
    2.1 總RNA提取及mRNA分離純化
    2.2 初級文庫的構建及鑒定
    2.3 次級文庫的構建及質量鑒定
3 討論
4 結論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]PK-15細胞酵母雙雜交三框cDNA文庫構建及鑒定[J]. 李珣,陳思宇,胡傳活,王曉曄.  南方農業(yè)學報. 2016(05)
[2]華東葡萄白河-35-1株系抗霜霉病基因cDNA文庫構建及EST分析[J]. 王沛雅,王躍進,張建文,朱自果,張朝紅.  農業(yè)生物技術學報. 2009(02)
[3]副溶血弧菌感染的九孔鮑血細胞均一化全長cDNA文庫的構建[J]. 王淑紅,鄒志華,張子平,施永春,王藝磊.  臺灣海峽. 2008(03)

碩士論文
[1]我國主要葡萄產區(qū)霜霉菌對烯酰嗎啉和嘧菌酯的抗藥性分析[D]. 王喜娜.中國農業(yè)科學院 2017
[2]葡萄霜霉菌誘導華東葡萄抗霜霉病基因cDNA文庫構建及EST分析[D]. 王沛雅.西北農林科技大學 2008



本文編號：3703410