【目的】構(gòu)建霜霉菌侵染后葡萄葉片的酵母雙雜交cDNA文庫,篩選致病因子在寄主葡萄體內(nèi)的互作靶標(biāo),為葡萄霜霉病菌致病的分子機(jī)理研究提供材料基礎(chǔ)�！痉椒ā恳砸荒晟鷼W亞種葡萄西拉盆栽苗為試驗(yàn)材料,提取并等量混合霜霉菌侵染后0、12、18、24和36 h的葡萄葉片總RNA,利用基于Gateway技術(shù)的CloneMiner Ⅱ cDNA文庫構(gòu)建試劑盒:首先將cDNA與pDONR222載體進(jìn)行BP重組反應(yīng)連接,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B感受態(tài)細(xì)胞構(gòu)建初級文庫;然后初級文庫質(zhì)粒與pGADT7-DEST載體通過LR重組反應(yīng),重組反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B感受態(tài)細(xì)胞構(gòu)建次級文庫;再隨機(jī)挑取次級文庫轉(zhuǎn)化Y187酵母菌株構(gòu)建酵母雙雜交cDNA文庫;最后利用ImageJ軟件和PCR反應(yīng)分別統(tǒng)計(jì)庫容量和鑒定重組率。【結(jié)果】構(gòu)建的初級文庫庫容量為4.6×10~7CFU,次級文庫庫容量為2.7×10~7CFU,均達(dá)到構(gòu)建cDNA文庫的標(biāo)準(zhǔn)。酵母雙雜交cDNA文庫的插入片段主要集中在1000～2000 bp,且具有很好的多態(tài)性,文庫質(zhì)量較高�！窘Y(jié)論】構(gòu)建的霜霉菌誘導(dǎo)葡萄葉片酵母雙雜交cDNA文庫符合酵母雙雜交... 

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 霜霉菌侵染
        1.2.2 RNA提取、反轉(zhuǎn)錄
        1.2.3 初級文庫（Uncut型）構(gòu)建及保存
        1.2.4次級文庫構(gòu)建及保存
        1.2.5 酵母雙雜交cDNA文庫質(zhì)量鑒定
        1.2.6 菌落計(jì)數(shù)方法
2 結(jié)果與分析
    2.1 總RNA提取及mRNA分離純化
    2.2 初級文庫的構(gòu)建及鑒定
    2.3 次級文庫的構(gòu)建及質(zhì)量鑒定
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PK-15細(xì)胞酵母雙雜交三框cDNA文庫構(gòu)建及鑒定[J]. 李珣,陳思宇,胡傳活,王曉曄.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2016(05)
[2]華東葡萄白河-35-1株系抗霜霉病基因cDNA文庫構(gòu)建及EST分析[J]. 王沛雅,王躍進(jìn),張建文,朱自果,張朝紅.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2009(02)
[3]副溶血弧菌感染的九孔鮑血細(xì)胞均一化全長cDNA文庫的構(gòu)建[J]. 王淑紅,鄒志華,張子平,施永春,王藝?yán)?  臺灣海峽. 2008(03)

碩士論文
[1]我國主要葡萄產(chǎn)區(qū)霜霉菌對烯酰嗎啉和嘧菌酯的抗藥性分析[D]. 王喜娜.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017
[2]葡萄霜霉菌誘導(dǎo)華東葡萄抗霜霉病基因cDNA文庫構(gòu)建及EST分析[D]. 王沛雅.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2008



本文編號：3703410