【背景】粘細(xì)菌是一類具有社會(huì)性行為的高等原核生物,能產(chǎn)生豐富、多樣、新穎的具有生物活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物,具有很大的研究開發(fā)價(jià)值。【目的】從土壤樣品中篩選出對(duì)致病疫霉（Phytophthora infestans）具有拮抗作用的粘細(xì)菌,并對(duì)其次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行研究。【方法】對(duì)分離到的一株拮抗P. infestans菌株,結(jié)合形態(tài)觀察和16S rRNA基因序列分析確定其分類地位,并通過(guò)單因素分析與正交優(yōu)化相結(jié)合的方法對(duì)菌株的發(fā)酵參數(shù)進(jìn)行研究。采用濾紙片法對(duì)其濃縮發(fā)酵液中活性物質(zhì)的穩(wěn)定性及抗菌活性進(jìn)行檢測(cè),并通過(guò)薄層色譜法（thin layer chromatography,TLC）與高效液相色譜法（high performance liquid chromatography,HPLC）等初步分離后,將具有抗P. infestans活性的組分利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-MS）進(jìn)行檢測(cè),最后通過(guò)離體葉片法測(cè)定活性物質(zhì)對(duì)馬鈴薯晚疫病的防病作用�！窘Y(jié)果】從土壤樣品中分離得到的菌株B25-Ⅰ-3對(duì)P. infestans表現(xiàn)出較強(qiáng)的拮抗活性,經(jīng)鑒定為橙色粘球菌（Myxococcus fulvu... 

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菌株B25-I-3的形態(tài)特征

如圖2A所示，菌株B25-I-3接種后經(jīng)2 d的遲緩期，在第2-3天進(jìn)入快速增長(zhǎng)期，第3-5天進(jìn)入第2個(gè)遲緩期，第5-7天再次進(jìn)入快速增長(zhǎng)期，第7天時(shí)菌體重量達(dá)到最大值，之后急速減少，進(jìn)入衰亡期，9 d后趨于穩(wěn)定。將菌株發(fā)酵培養(yǎng)后，濾紙片法分別檢測(cè)其胞內(nèi)物及胞外物對(duì)致病疫霉的抗性。結(jié)果如圖2B所示，菌株B25-I-3的胞外物對(duì)致病疫霉的生長(zhǎng)表現(xiàn)出一定的抑制作用，但并未檢測(cè)到胞內(nèi)物的抑菌活性，可初步說(shuō)明菌株B25-I-3的抗致病疫霉活性物質(zhì)主要存在于細(xì)胞外。2.3.2 菌株B25-I-3發(fā)酵條件優(yōu)化結(jié)果

溫度為25-30°C時(shí)，菌株B25-I-3發(fā)酵上清液對(duì)P.infestans的抑制活性隨溫度的升高而增強(qiáng)，30°C時(shí)達(dá)到最高，菌絲生長(zhǎng)邊緣距濾紙片為6.5 mm，之后抑菌活性隨溫度的增高而降低(圖3D)，說(shuō)明溫度過(guò)高或過(guò)低都不利于M.fulvus B25-I-3活性物質(zhì)的產(chǎn)生，因其最佳發(fā)酵溫度為30°C。選取對(duì)抑菌活性影響較大的接種量、溫度與周期這3個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)，方案及結(jié)果如表6所示。菌株B25-I-3經(jīng)不同接種量、溫度、周期產(chǎn)生的發(fā)酵上清液對(duì)P.infestans的抑制活性不同。其最優(yōu)發(fā)酵條件為：接種量10%，溫度30°C，周期7 d。極差分析可知影響發(fā)酵上清液抑制P.infestans活性的順序?yàn)椋簻囟?gt;接種量>周期。

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
[1]橙色黏球菌的分離鑒定及其抑菌活性研究[D]. 張宜濤.河南工業(yè)大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3603915