發(fā)布時間：2021-11-26 06:32

　　克隆了柑橘CsNBS-LRR基因,分析該基因在柑橘潰瘍病菌（Xcc）、水楊酸、茉莉酸甲酯誘導(dǎo)下的表達(dá)特征,通過在晚錦橙中超量表達(dá)驗證其功能。結(jié)果表明,CsNBS-LRR的開放閱讀框為3 633bp,編碼1 210個氨基酸。其在感病品種晚錦橙中受Xcc誘導(dǎo)下調(diào)表達(dá),而在低感品種四季橘中上調(diào)表達(dá);在四季橘中受水楊酸誘導(dǎo)明顯上調(diào)表達(dá),而晚錦橙中上調(diào)幅度較小;兩品種CsNBS-LRR受茉莉酸甲酯誘導(dǎo)均不明顯;超量表達(dá)載體轉(zhuǎn)化晚錦橙獲得4個陽性植株;抗性評價表明超量表達(dá)CsNBS-LRR明顯提升了轉(zhuǎn)基因植株對柑橘潰瘍病的相對抗性（病情指數(shù)為野生型的75%～88%）;轉(zhuǎn)基因植株中水楊酸含量和水楊酸合成途徑中關(guān)鍵基因轉(zhuǎn)錄水平明顯提高;水楊酸信號途徑中的PR基因轉(zhuǎn)錄水平也升高。綜上所述,CsNBS-LRR是柑橘抗?jié)儾〉?個抗病基因,它可能通過對水楊酸途徑的調(diào)控一定程度上增強柑橘對潰瘍病抗性。 

【文章來源】：園藝學(xué)報. 2020,47(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

CsNBS-LRR基因結(jié)構(gòu)（A）和其功能結(jié)構(gòu)域（B)

CsNBS-LRR的誘導(dǎo)表達(dá)特征

為了更好的理解CsNBS-LRR在抗Xcc中的作用，利用反向遺傳學(xué)方法研究了它的功能。構(gòu)建了具有GUS編碼序列的CsNBS-LRR超量表達(dá)載體pLGNe-CsNBS-LRR（圖3,A）。CsNBS-LRR將在組成型啟動子CaMV 35S的驅(qū)動下實現(xiàn)超量表達(dá)。晚錦橙轉(zhuǎn)基因植株通過基因組PCR鑒定得到4個轉(zhuǎn)基因植株，擴增得到大約1.7 kb的特征片段，而野生型植株無擴增（圖3,B）。對這4個植株進(jìn)行GUS染色均檢測到藍(lán)色，為轉(zhuǎn)基因陽性苗，野生型呈無色（圖3,C）。就表型而言，同野生型相比，轉(zhuǎn)基因植株表現(xiàn)出相似的生長速率和生長狀態(tài)（圖3,D）。這4個轉(zhuǎn)基因植株中CsNBS-LRR均得到了較高水平的表達(dá)，分別為野生型的47倍、68倍、62倍和49倍（圖3,E）。2.4 CsNBS-LRR超量表達(dá)植株的抗性評價

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]柑橘潰瘍病相關(guān)基因CsPGIP的克隆與表達(dá)[J]. 胡安華,祁靜靜,張慶雯,陳善春,鄒修平,許蘭珍,彭愛紅,雷天剛,姚利曉,龍琴,何永睿,李強.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(04)
[2]柑橘潰瘍病菌分化及防治研究進(jìn)展[J]. 姚廷山,周彥,周常勇.  園藝學(xué)報. 2015(09)
[3]蘋果NBS-LRR1基因的鑒定與表達(dá)分析[J]. 宋霄,柏素花,戴洪義.  園藝學(xué)報. 2013(07)



本文編號：3519589