【目的】建立一種景天科多肉植物紅心蓮莖腐病菌尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）快速、簡便、靈敏的LAMP可視化檢測方法,在莖腐病發(fā)生初期實(shí)現(xiàn)病原菌的快速準(zhǔn)確檢測,為病害的早期監(jiān)測、診斷及防治提供依據(jù)�！痉椒ā恳訣F-1a（Elongation factor-1α）基因序列為靶序列,設(shè)計(jì)LAMP（Loopmediated isothermal amplification）特異性引物;以紅心蓮尖孢鐮刀菌DNA為模板,優(yōu)化反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間,建立LAMP檢測反應(yīng)體系,開展特異性和靈敏度驗(yàn)證及田間病株檢測�！窘Y(jié)果】建立的LAMP反應(yīng)體系可有效檢測出多肉植物紅心蓮莖腐病尖孢鐮刀菌,最佳反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間分別為65℃,60 min;特異性驗(yàn)證表明紅心蓮尖孢鐮刀菌DNA呈綠色陽性反應(yīng),靈敏度驗(yàn)證表明LAMP檢測最小質(zhì)量濃度是10 fg·μL-1,比常規(guī)PCR提高了10倍;采用LAMP法對15份疑似紅心蓮莖腐病田間樣本進(jìn)行快速檢測,檢出率為100%�！窘Y(jié)論】本研究建立的多肉植物紅心蓮莖腐病菌LAMP快速檢測方法不僅特異性強(qiáng)、靈敏度高,而且檢測結(jié)果可視、假陽性低,適合田間尖孢鐮刀菌引起的... 

【文章來源】：福建農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2020,35(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

LAMP靈敏度檢測驗(yàn)證

特異性驗(yàn)證：對27株供試菌株進(jìn)行LAMP檢測，通過觀察LAMP產(chǎn)物顏色判定擴(kuò)增結(jié)果；后從反應(yīng)菌株中挑選1株從紅心蓮上分離的F.oxysporum,3株從多肉植物上分離的Colletotrichum destructivum、Corynespora cassiicola和Alternaria alternata,3株從其他寄主植物上分離的鐮刀菌屬菌株F.moniliforme、F.solani和F.sporotrichioides，共7株菌株進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，以無菌雙蒸水為陰性對照，通過判定電泳梯形條帶的有無驗(yàn)證LAMP檢測的特異性。試驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)。靈敏度驗(yàn)證：將紅心蓮尖孢鐮刀菌樣本DNA按10倍濃度梯度依次稀釋為10 ng·μL-1～1 fg·μL-18個不同濃度，同時進(jìn)行LAMP檢測和PCR檢測，比對2種檢測方法的靈敏度差異；試驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)。

LAMP檢測結(jié)果可靠性驗(yàn)證表明，陽性對照呈綠色，對應(yīng)的瓊脂糖凝膠電泳擴(kuò)增出梯形條帶；陰性對照呈現(xiàn)黃綠色，瓊脂糖凝膠電泳無梯形條帶（圖3）。表明建立的LAMP檢測方法可行，能可靠檢測到紅心蓮尖孢鐮刀菌F.oxysporum。圖3 LAMP檢測紅心蓮尖孢鐮刀菌Fusarium oxysporum

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]馬鈴薯S病毒PVSO株系RT-LAMP檢測方法的建立及應(yīng)用[J]. 李華偉,許泳清,羅文彬,紀(jì)榮昌,劉中華,許國春,張鴻,李國良,林趙淼,邱永祥,邱思鑫,湯浩.  園藝學(xué)報. 2018(08)
[2]燕麥鐮孢菌環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增（LAMP）檢測方法的建立與應(yīng)用[J]. 漆永紅,曹素芳,李雪萍,李敏權(quán).  草地學(xué)報. 2018(04)
[3]大豆莖褐腐病菌環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增檢測技術(shù)的建立[J]. 吳旭東,陸辰晨,沈浩,吳翠萍,張海峰,王源超,鄭小波.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2015(04)
[4]河北和內(nèi)蒙古馬鈴薯干腐病菌種類鑒定[J]. 魏巍,朱杰華,張宏磊,楊志輝.  植物保護(hù)學(xué)報. 2013(04)

碩士論文
[1]應(yīng)用LAMP檢測技術(shù)快速診斷大豆根莖部真菌病害[D]. 宋必.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號：3493655