【目的】建立一種景天科多肉植物紅心蓮莖腐病菌尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）快速、簡便、靈敏的LAMP可視化檢測方法,在莖腐病發(fā)生初期實現(xiàn)病原菌的快速準確檢測,為病害的早期監(jiān)測、診斷及防治提供依據(jù)�！痉椒ā恳訣F-1a（Elongation factor-1α）基因序列為靶序列,設計LAMP（Loopmediated isothermal amplification）特異性引物;以紅心蓮尖孢鐮刀菌DNA為模板,優(yōu)化反應溫度和反應時間,建立LAMP檢測反應體系,開展特異性和靈敏度驗證及田間病株檢測�！窘Y果】建立的LAMP反應體系可有效檢測出多肉植物紅心蓮莖腐病尖孢鐮刀菌,最佳反應溫度、反應時間分別為65℃,60 min;特異性驗證表明紅心蓮尖孢鐮刀菌DNA呈綠色陽性反應,靈敏度驗證表明LAMP檢測最小質量濃度是10 fg·μL-1,比常規(guī)PCR提高了10倍;采用LAMP法對15份疑似紅心蓮莖腐病田間樣本進行快速檢測,檢出率為100%�！窘Y論】本研究建立的多肉植物紅心蓮莖腐病菌LAMP快速檢測方法不僅特異性強、靈敏度高,而且檢測結果可視、假陽性低,適合田間尖孢鐮刀菌引起的... 

【文章來源】：福建農業(yè)學報. 2020,35(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

LAMP靈敏度檢測驗證

特異性驗證：對27株供試菌株進行LAMP檢測，通過觀察LAMP產(chǎn)物顏色判定擴增結果；后從反應菌株中挑選1株從紅心蓮上分離的F.oxysporum,3株從多肉植物上分離的Colletotrichum destructivum、Corynespora cassiicola和Alternaria alternata,3株從其他寄主植物上分離的鐮刀菌屬菌株F.moniliforme、F.solani和F.sporotrichioides，共7株菌株進行瓊脂糖凝膠電泳，以無菌雙蒸水為陰性對照，通過判定電泳梯形條帶的有無驗證LAMP檢測的特異性。試驗設3次重復。靈敏度驗證：將紅心蓮尖孢鐮刀菌樣本DNA按10倍濃度梯度依次稀釋為10 ng·μL-1～1 fg·μL-18個不同濃度，同時進行LAMP檢測和PCR檢測，比對2種檢測方法的靈敏度差異；試驗設3次重復。

LAMP檢測結果可靠性驗證表明，陽性對照呈綠色，對應的瓊脂糖凝膠電泳擴增出梯形條帶；陰性對照呈現(xiàn)黃綠色，瓊脂糖凝膠電泳無梯形條帶（圖3）。表明建立的LAMP檢測方法可行，能可靠檢測到紅心蓮尖孢鐮刀菌F.oxysporum。圖3 LAMP檢測紅心蓮尖孢鐮刀菌Fusarium oxysporum

【參考文獻】：
期刊論文
[1]馬鈴薯S病毒PVSO株系RT-LAMP檢測方法的建立及應用[J]. 李華偉,許泳清,羅文彬,紀榮昌,劉中華,許國春,張鴻,李國良,林趙淼,邱永祥,邱思鑫,湯浩.  園藝學報. 2018(08)
[2]燕麥鐮孢菌環(huán)介導等溫擴增（LAMP）檢測方法的建立與應用[J]. 漆永紅,曹素芳,李雪萍,李敏權.  草地學報. 2018(04)
[3]大豆莖褐腐病菌環(huán)介導等溫擴增檢測技術的建立[J]. 吳旭東,陸辰晨,沈浩,吳翠萍,張海峰,王源超,鄭小波.  南京農業(yè)大學學報. 2015(04)
[4]河北和內蒙古馬鈴薯干腐病菌種類鑒定[J]. 魏巍,朱杰華,張宏磊,楊志輝.  植物保護學報. 2013(04)

碩士論文
[1]應用LAMP檢測技術快速診斷大豆根莖部真菌病害[D]. 宋必.南京農業(yè)大學 2015



本文編號：3493655