發(fā)布時間：2021-11-02 06:54

　　非核糖體類抗生素edeines是短短芽胞桿菌Brevibacillus brevis X23產(chǎn)生的主要抑菌物質(zhì),提高其產(chǎn)量有助于增加生防效果。通過全基因組測序及生物信息學(xué)分析挖掘短短芽胞桿菌X23的全局性調(diào)控因子,基于Red/ET同源重組技術(shù)構(gòu)建溫敏型敲除載體,通過雙交換同源重組技術(shù)獲得短短芽胞桿菌X23全局性轉(zhuǎn)錄負(fù)調(diào)控因子缺失的突變株,然后采用平板抑菌、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）和實(shí)時熒光定量PCR研究了全局性轉(zhuǎn)錄負(fù)調(diào)控因子敲除對短短芽胞桿菌X23不同生長時期發(fā)酵液的抑菌活性、edeines產(chǎn)量、ede操縱子轉(zhuǎn)錄水平的影響。從短短芽胞桿菌X23基因組中挖掘到了1個全局性轉(zhuǎn)錄負(fù)調(diào)控因子AbrB,敲除abrB基因后edeines生物合成基因簇操縱子的轉(zhuǎn)錄水平在生長前期顯著提高,在發(fā)酵48 h后abrB突變株中edeine A和edeine B總產(chǎn)量比出發(fā)菌株提高了1.1倍。結(jié)果顯示短短芽胞桿菌X23中AbrB是edeines生物合成過程中的負(fù)調(diào)控因子,敲除abrB提高了edeines的產(chǎn)量。 

【文章來源】：中國生物防治學(xué)報. 2020,36(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【部分圖文】：

野生型X23菌株中abrB基因敲除流程以及轉(zhuǎn)化子菌落PCR鑒定

從野生型X23基因組（NCBI登錄號：NZ＿CP023474.1）中找到了一個注釋為abr B的基因，長度249 bp，編碼的AbrB蛋白編號（登錄號：WP＿007719913.1）。與土壤短芽胞桿菌Br.agri（登錄號：ELK42020.1）的AbrB蛋白序列相似性高達(dá)100%，與短芽胞桿菌屬Brevibacillus spp.內(nèi)的其他多個種的AbrB蛋白序列相似性在95%以上。與其他屬的相似性分析表明，野生型X23菌株的AbrB與類芽胞桿菌屬（Paenibacillus spp.，登錄號：AEI46109.1）的AbrB蛋白氨基酸相似性最高，在83%～89%，與芽胞桿菌屬（Bacillus spp.）的AbrB蛋白序列相似性也在70%以上，其中與模式菌枯草芽胞桿菌168的AbrB蛋白序列（登錄號：NC＿000964.3）相似性達(dá)70.7%，其中N端的序列高度保守（圖2A），并在染色體中abrB基因上下游的基因也與枯草芽胞桿菌168一致（圖2B）。與解淀粉芽胞桿菌SQR9的abrB基因序列（登錄號：NZ＿CP006890.1）的相似性達(dá)72.6%（圖2A）�；谏鲜龇治�，初步確定該蛋白就是野生型X23菌株中全局調(diào)控因子AbrB。2.2 ΔabrB X23菌株的構(gòu)建

轉(zhuǎn)化子菌落PCR目的條帶大小與理論一致。PCR產(chǎn)物測序結(jié)果顯示無突變，表明野生型X23中的abrB基因已經(jīng)被成功敲除（圖3）。2.3 abrB敲除對X23菌株生長的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]短短芽孢桿菌X23外泌edeineB純化和鑒定[D]. 盧行.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[2]生防菌Brevibacillus brevis X23的全基因組測序與抑菌機(jī)理研究[D]. 李林.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號：3471551