【目的】柑橘黃龍�。–itrus Huanglongbing,HLB）是柑橘產(chǎn)業(yè)的頭號(hào)殺手,其病原主要是韌皮部桿菌屬亞洲種（Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas）,為革蘭氏陰性菌,田間主要經(jīng)亞洲柑橘木虱（Diaphorina citri）傳播,為深入研究該病菌分泌蛋白的功能,筆者篩選其中1個(gè)分泌蛋白,進(jìn)行原核表達(dá)并制備抗體�！痉椒ā吭O(shè)定4點(diǎn)條件從Prasad等預(yù)測(cè)的166個(gè)分泌蛋白基因中篩選,與pET-28a構(gòu)建重組表達(dá)載體,以原核表達(dá)的融合蛋白作為抗原,用于注射兔子,制備多克隆抗體�！窘Y(jié)果】從預(yù)測(cè)的166個(gè)分泌蛋白基因中篩選出05150基因,成功構(gòu)建表達(dá)載體pET-28a-05150,表達(dá)菌株pET-28a-05150在18℃、0.1 mmol·L^-1 IPTG濃度條件下誘導(dǎo)的目的蛋白為包涵體。獲得的pET-28a-05150抗血清通過(guò)ELISA效價(jià)為1∶4 000,通過(guò)dot ELISA檢測(cè)手段可與田間感病樣品發(fā)生顯色反應(yīng),通過(guò)Western blot能與融合蛋白雜交出特異性條帶。【結(jié)論】該研究篩選了CLas的分泌蛋白基... 

【文章來(lái)源】：果樹學(xué)報(bào). 2020,37(09)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【部分圖文】：

RT-PCR間接驗(yàn)證感病柑橘中分泌蛋白05150的表達(dá)

獲得的陽(yáng)性單克隆經(jīng)測(cè)序結(jié)果表明，陽(yáng)性單克隆的05150片段大小正確，堿基無(wú)缺失、無(wú)突變發(fā)生，且編碼框方向正確、無(wú)移位。NdeⅠ、XhoⅠ雙酶切如圖2-B所示，獲得大小符合預(yù)期的2條目的條帶，因此將測(cè)序和酶切驗(yàn)證正確的重組載體命名為p ET-28a-05150，作為原核表達(dá)的重組質(zhì)粒。圖3 來(lái)自6個(gè)CLas分離株的05150核苷酸序列的DNAMAN比對(duì)

來(lái)自6個(gè)CLas分離株的05150核苷酸序列的DNAMAN比對(duì)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[3]應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)研究亞洲韌皮部桿菌在寄主體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化及分布[D]. 胡浩.重慶大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3343022