為獲得對煙草疫霉菌生防效果更佳的拮抗菌株,對多粘類芽胞桿菌LB-9進行基因誘變。利用原生質(zhì)體電轉(zhuǎn)化法,構(gòu)建了菌株LB-9的Tn-5轉(zhuǎn)座插入突變體庫,獲得約2000個轉(zhuǎn)化子,通過平板對峙法篩選出對煙草疫霉菌拮抗能力增強且效果穩(wěn)定的突變菌株3個,其中編號為A13的突變菌株對煙草疫霉菌的抑制效果達到80%以上,與原始菌株LB-9的抑菌率相比提高了20%以上。采用室內(nèi)盆栽接種法研究了正突變菌株A13對煙草黑脛病的防控效果,并利用實時熒光定量PCR法初步分析了其誘導煙株體內(nèi)抗病相關(guān)基因的表達。結(jié)果表明,正突變菌株A13處理煙株7d后,對煙草黑脛病的防效高于原始菌株LB-9,防效可達80%以上,同時可誘導煙株體內(nèi)不同信號通路中抗性相關(guān)基因的上調(diào)表達。本研究為多粘類芽胞桿菌插入誘變育種方法研究提供了理論支撐,對煙草黑脛病的生物防治具有重要意義。 

【文章來源】：中國生物防治學報. 2020,36(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

利用原生質(zhì)體電轉(zhuǎn)化法獲得的轉(zhuǎn)化子

根據(jù)Ez-Tn5的卡那霉素抗性基因設(shè)計特異性引物對Kan-F/Kan-R，對隨機挑選的20個轉(zhuǎn)化子進行PCR擴增，均能得到約500 bp的目的片段，而原始菌株LB-9中未擴出相應的條帶（圖2）。由此說明轉(zhuǎn)座子已成功插入到LB-9基因組中。2.3 多粘類芽胞桿菌LB-9插入突變菌株對煙草疫霉菌的抑制效果

熒光定量PCR結(jié)果表明，在灌施正突變菌株A13發(fā)酵液后接種煙草疫霉菌12 h，就可誘導煙株體內(nèi)水楊酸信號通路關(guān)鍵基因PR1a的上調(diào)表達，隨著接種時間延長，基因表達量不斷增加，且顯著高于原始菌株LB-9誘導的基因表達量。接種72 h后，可誘導乙烯信號通路、茉莉酸信號通路關(guān)鍵基因PR3b、COI1的顯著上調(diào)表達，而乙烯信號通路標志基因PDF1.2的表達量顯著下降（圖3）。由此說明，拮抗菌LB-9和正突變菌株A13誘導的煙株對煙草黑脛病的抗性可能與植物激素信號通路相關(guān)。3 討論

【參考文獻】：
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本文編號：3331094