AMEP蛋白是從枯草芽孢桿菌中分離鑒定的一種新型蛋白激發(fā)子,能夠激發(fā)植物免疫,提高植物抗病性。經(jīng)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),AMEP蛋白的編碼基因在芽孢桿菌屬的菌株中廣泛分布,但各菌株AMEP蛋白的表達(dá)產(chǎn)量和活性還有待研究。該研究對(duì)實(shí)驗(yàn)室保藏的多株芽孢桿菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增鑒定基因,篩選出含有AMEP編碼基因的菌株;通過(guò)蛋白表達(dá)純化和定量確定了各菌株AMEP蛋白的表達(dá)量;并通過(guò)過(guò)敏反應(yīng)試驗(yàn)比較各菌株AMEP蛋白的功能活性,確定菌株BU396產(chǎn)AMEP蛋白的表達(dá)量最高,且具有正常的功能活性,適合于作為今后AMEP蛋白的表達(dá)菌株。 

【文章來(lái)源】：安徽農(nóng)學(xué)通報(bào). 2020,26(20)

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多株芽孢桿菌AMEP蛋白編碼基因的PCR擴(kuò)增

經(jīng)過(guò)對(duì)AMEP蛋白的表達(dá)、純化以及濃度測(cè)定，檢測(cè)了各芽孢桿菌菌株（BU66、BU108、BU278、BU396和BU412）中AMEP蛋白表達(dá)量的差異，其結(jié)果如圖2所示。由圖2可知，5株菌中菌株BU396為AMEP蛋白產(chǎn)量最高的菌株，其產(chǎn)量可達(dá)到1.8mg/m L。其他4株菌株BU108、BU278、BU412和BU66的AMEP的蛋白產(chǎn)量分別為1.37mg/m L、1.73mg/m L、1.72mg/m L和1.12mg/m L。5株芽孢桿菌中，菌株BU66目標(biāo)蛋白的產(chǎn)量最低僅為1.12mg/m L。菌株BU396的AMEP蛋白產(chǎn)量顯著高于其他菌株，而B(niǎo)U66、BU108的AMEP蛋白產(chǎn)量則顯著低于其他菌株。2.3 各芽孢桿菌菌株AMEP蛋白活性的差異

將測(cè)定濃度的AMEP蛋白進(jìn)行稀釋?zhuān)刂频鞍诐舛葹?.5mg/m L，以低鹽溶液作為對(duì)照組CK。采取0.2m L樣品量分3次注射于煙草葉片后，將煙草置于黑暗環(huán)境下24h后觀察煙草葉片壞死枯斑的大小，結(jié)果如圖3所示。由圖3可知，在5株菌株中菌株BU66中AMEP蛋白活性最低，其他4株菌株蛋白激發(fā)子活性則大致基本相同。綜合分析，可以確定BU396菌株的AMEP蛋白產(chǎn)量最高，且活性好，適合為今后AMEP蛋白的表達(dá)菌株。3 討論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]酶活性中心穩(wěn)定化策略提高褶皺假絲酵母脂肪酶的穩(wěn)定性[D]. 張小飛.上海交通大學(xué) 2016

碩士論文
[1]大麗輪枝菌蛋白激發(fā)子純化、基因克隆與功能分析[D]. 王炳楠.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011



本文編號(hào)：3320550