鐮刀菌產(chǎn)生的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)是糧食中最常見的一類真菌毒素。它們及其產(chǎn)生的真菌毒素導(dǎo)致糧食和飼料污染腐爛、真菌毒素的污染給全世界造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究旨在利用生物技術(shù)降解DON,削減其危害,保障糧油及食品質(zhì)量安全,主要開展了DON降解菌的篩選、鑒定、降解產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)推測(cè)、降解酶的初步研究等工作,主要?dú)w結(jié)如下： 以DON為唯一碳源,通過(guò)平板分離純化,經(jīng)高效液相色譜(HPLC)檢測(cè),對(duì)降解效果較高的菌株進(jìn)行分子鑒定。最終篩選得到的菌株對(duì)DON的降解率達(dá)56.61%,通過(guò)16S rDNA序列分析,鑒定為假單胞桿菌。篩選出的菌株對(duì)DON有較好的降解效果。 通過(guò)Q-TOF質(zhì)譜分析,發(fā)現(xiàn)降解菌降解DON產(chǎn)生了新的降解產(chǎn)物,碎片離子為m/z265.1345,可能失去CH2O,通過(guò)結(jié)構(gòu)分析,推測(cè)出了降解產(chǎn)物的可能結(jié)構(gòu)。 酒糟蛋白(DDG)中加入降解酶3h后,降解率達(dá)53.71%。處理12h后,降解率達(dá)88.66%,說(shuō)明該降解酶對(duì)糖化醪中的DON有明顯的降解效果。DDG經(jīng)過(guò)乳化后,能提高降解效果,但加酶后的乳化產(chǎn)生的高剪切力會(huì)略微影響酶活。酸性條件下會(huì)嚴(yán)重影響...

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 DON的基本性質(zhì)
        1.1.1 理化性質(zhì)
        1.1.2 DON的產(chǎn)生
    1.2 DON的危害
        1.2.1 DON對(duì)人的影響
        1.2.2 DON對(duì)細(xì)胞的影響
        1.2.3 DON對(duì)動(dòng)物的影響
    1.3 DON的污染狀況
        1.3.1 糧食中DON的污染狀況
        1.3.2 食品中DON的污染狀況
        1.3.3 飼料中DON的污染狀況
    1.4 DON的檢測(cè)方法
        1.4.1 免疫學(xué)檢測(cè)
        1.4.2 物理化學(xué)檢測(cè)
    1.5 DON的削減方法
        1.5.1 物理方法
        1.5.2 化學(xué)方法
        1.5.3 生物方法
    1.6 生物降解途徑
        1.6.1 3C—OH氧化作用
        1.6.2 環(huán)氧鍵開環(huán)
        1.6.3 水合作用
        1.6.4 糖苷化作用
        1.6.5 3C-異構(gòu)化作用
    1.7 研究目的和意義
第二章 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇降解菌的篩選與鑒定
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 菌種與培養(yǎng)基
        2.1.2 試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 樣品的采集
        2.2.2 菌株的分離和純化
        2.2.3 降解菌株的篩選
        2.2.4 DON的檢測(cè)
        2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        2.2.6 形態(tài)鑒定
        2.2.7 生長(zhǎng)曲線
        2.2.8 分子鑒定
        2.2.9 序列的數(shù)據(jù)處理
        2.2.10 Q-TOF系統(tǒng)參數(shù)
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 采樣
        2.3.2 降解菌的篩選
        2.3.3 降解菌的鑒定
        2.3.4 16S rDNA序列系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.3.5 降解產(chǎn)物Q-TOF分析
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第三章 大腸桿菌表達(dá)降解酶的初步研究
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 供試菌株
        3.1.2 培養(yǎng)基
        3.1.3 試劑
        3.1.4 儀器設(shè)備
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 降解酶的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.2 降解酶降解DDG中的DON
        3.2.3 降解酶降解DDGS中的DON
        3.2.4 樣品的處理
        3.2.5 降解效果的檢測(cè)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 降解酶的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.3.2 HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.3.3 降解酶降解DDG中的DON
        3.3.4 降解酶降解DDGS中的DON
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第四章 畢赤酵母表達(dá)降解酶的初步研究
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 供試菌株
        4.1.2 培養(yǎng)基
        4.1.3 試劑
        4.1.4 儀器設(shè)備
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 工程菌的誘導(dǎo)表達(dá)
        4.2.2 溫度對(duì)酶活的影響
        4.2.3 pH對(duì)酶活的影響
        4.2.4 降解酶降解PBS中的DON
        4.2.5 降解酶降解DDGS中的DON
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 降解酶的表達(dá)
        4.3.2 溫度對(duì)酶活的影響
        4.3.3 pH對(duì)酶活的影響
        4.3.4 降解酶降解PBS中的DON
        4.3.5 降解酶降解DDGS中的DON
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3939616