隨著工業(yè)的發(fā)展，石油等化石燃料的消耗不斷增加，以此同時給環(huán)境帶來的污染越發(fā)嚴重，多環(huán)芳烴作為主要的污染物之一對生物的毒性最大。除去環(huán)境中的多環(huán)芳烴最好的方法就是微生物降解。本研究從實驗室保存的一株能高效降解多環(huán)芳烴的多食鞘氨醇桿菌SWH-2中克隆出環(huán)羥基化雙加氧酶大亞基的編碼基因，并進行測序。將獲得的基因通過基因工程技術(shù)轉(zhuǎn)化到SWH-2的染色體DNA中，完成對SWH-2的遺傳改造，得到一株新菌株SWH-21。降解實驗表明SWH-21對多環(huán)芳烴的降解能力高于SWH-2。本實驗還研究了SWH-21對石油污染土壤的修復(fù)情況。本課題主要研究成果如下： 1．根據(jù)GeneBank上已有的環(huán)羥基化雙加氧酶大亞基的編碼基因序列，設(shè)計了一對簡并引物。根據(jù)該引物的Tm值和GC含量，選擇合適的PCR條件進行PCR，成功擴增出環(huán)羥基化雙加氧酶大亞基的編碼基因，并將該基因成功連接到pMD-18載體上，完成轉(zhuǎn)化。 2.將環(huán)羥基化雙加氧酶大亞基的編碼基因與自殺性質(zhì)粒put-km1連接，成功構(gòu)建出重組自殺性質(zhì)粒，并成功轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α—λpir。 3.通過三親雜交技術(shù)成功將環(huán)羥基化雙加氧酶大亞基的編碼基因整合到...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 環(huán)境中的 PAHs
        1.1.1 大氣中的 PAHs
        1.1.2 土壤中的 PAHs
        1.1.3 水體中的 PAHs
    1.2 微生物降解 PAHs 的研究進展
        1.2.1 真菌對 PAHs 的降解
        1.2.2 細菌對 PAHs 的降解
        1.2.3 其他微生物對 PAHs 的降解
        1.2.4 PAHs 的降解機制及影響因子
    1.3 PAHs 降解酶的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 PAHs 降解酶在 PAHs 降解中的作用
        1.3.2 單加氧酶
        1.3.3 雙加氧酶
        1.3.4 過氧化物酶及酪氨酸酶
    1.4 PCR 技術(shù)
        1.4.1 PCR 的基本原理
        1.4.2 PCR 反應(yīng)體系及反應(yīng)程序
        1.4.3 引物的設(shè)計
    1.5 石油污染土壤的生物修復(fù)
        1.5.1 石油污染土壤的危害
        1.5.2 生物修復(fù)
    1.6 本論文的研究背景、內(nèi)容及意義
第二章 實驗方案設(shè)計與研究方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株與質(zhì)粒
        2.1.2 主要儀器與試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 溶劑
    2.2 研究方法
        2.2.1 多食鞘氨醇桿菌 SWH-2 基因組的提取
        2.2.2 環(huán)羥基化雙加氧酶大亞基編碼基因引物的設(shè)計
        2.2.3 PCR 擴增
        2.2.4 PCR 產(chǎn)物的回收及連接
        2.2.5 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備
        2.2.6 PCR 產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化及藍白斑篩選
        2.2.7 質(zhì)粒的提取——堿性 SDS 法
        2.2.8 質(zhì)粒的提取——試劑盒法
        2.2.9 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
        2.2.10 重組子的菌液 PCR 鑒定
        2.2.11 三親雜交及生長曲線的測定
        2.2.12 氣相色譜法測培養(yǎng)基中菲的含量
        2.2.13 三角瓶中石油降解實驗
        2.2.14 菌劑的制作及生物修復(fù)石油污染土壤
        2.2.15 索氏提取法測土壤中石油含量
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 SWH-2 菌的遺傳改造
        3.1.1 細菌染色體 DNA 的提取
        3.1.2 環(huán)羥基化雙加氧酶大亞基的克隆
        3.1.3 PCR 產(chǎn)物與 T 載體的連接，轉(zhuǎn)化和篩選
        3.1.4 自殺性質(zhì)粒的構(gòu)建，轉(zhuǎn)化及篩選
        3.1.5 三親雜交及生長曲線
    3.2 菌 SWH-21 及菌 SWH-2 對菲及石油的降解
        3.2.1 菲的降解實驗
        3.2.2 石油的降解實驗
    3.3 菌 SWH-21 對石油污染土壤的修復(fù)
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄



本文編號：3932100