鄰苯二甲酸酯類(lèi)(PAEs)的污染對(duì)生態(tài)系統(tǒng)形成了嚴(yán)重威脅,蚯蚓是土壤生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分和類(lèi)群最大的一類(lèi)生物,利用蚯蚓作為指示生物來(lái)反映土壤污染狀況,為合理評(píng)價(jià)土壤生態(tài)安全提供科學(xué)依據(jù)。本研究選擇3種鄰苯二甲酸酯類(lèi)物質(zhì)(DMP、DEP、DBP),以赤子愛(ài)勝蚓(Eisenia foetida)為研究對(duì)象,從個(gè)體水平,細(xì)胞水平和大分子水平研究其毒性效應(yīng)。同時(shí)還以人乳腺癌雌激素受體陽(yáng)性細(xì)胞株MCF-7采用體外試驗(yàn)方法研究了DMP、DEP和DBP的類(lèi)雌激素效應(yīng),彌補(bǔ)了當(dāng)前關(guān)于PAEs的內(nèi)分泌干擾性能方面資料的不足,為全面評(píng)價(jià)PAEs化合物的毒性作用提供了科學(xué)依據(jù)。 主要研究結(jié)果如下： (1)采用濾紙接觸法,研究DMP、DEP對(duì)赤子愛(ài)勝蚓(Eisenia foetida)的急性毒性效應(yīng),實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：蚯蚓對(duì)DMP、DEP兩者表現(xiàn)出相似的中毒癥狀,染毒48h時(shí),DMP的LD5o為129、603μg/cm2, DEP的LD50為145.336μg/cm2。采用自然土壤法研究DMP、DEP對(duì)蚯蚓的急性毒性效應(yīng),實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：染毒14d時(shí),DMP的LD5o為1560.120mg/kg, DEP的LD5...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 PAEs簡(jiǎn)介
        1.1.1 PAEs的性質(zhì)和危害
        1.1.2 PAEs的污染現(xiàn)狀
        1.1.3 PAEs的雌激素效應(yīng)
    1.2 蚯蚓在分子生態(tài)毒理學(xué)評(píng)價(jià)中的應(yīng)用簡(jiǎn)介
        1.2.1 蚯蚓在生態(tài)毒理學(xué)評(píng)價(jià)中的意義和測(cè)試方法
        1.2.2 蚯蚓在生態(tài)毒理學(xué)評(píng)價(jià)中的生物標(biāo)記物
    1.3 體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?br>    1.4 分子生物學(xué)技術(shù)在毒理機(jī)制研究中的應(yīng)用
        1.4.1 核酸定量技術(shù)簡(jiǎn)介
        1.4.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的原理及方法
        1.4.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR幾個(gè)重要參數(shù)
        1.4.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的種類(lèi)
    1.5 研究背景及意義
    1.6 研究?jī)?nèi)容、創(chuàng)新點(diǎn)、技術(shù)路線
        1.6.1 研究?jī)?nèi)容
        1.6.2 創(chuàng)新點(diǎn)
        1.6.3 技術(shù)路線
    參考文獻(xiàn)
第二章 DMP、DEP和DBP的急性毒性效應(yīng)
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 受試生物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 供試土壤
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 濾紙法測(cè)定DMP和DEP的急性毒性效應(yīng)
            2.2.1.1 濾紙法試驗(yàn)濃度設(shè)計(jì)
            2.2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.2 土壤法測(cè)定DMP和DEP的急性毒性效應(yīng)
            2.2.2.1 土壤法試驗(yàn)濃度設(shè)計(jì)
            2.2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 數(shù)據(jù)分析
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 濾紙法測(cè)定DMP和DEP對(duì)蚯蚓的急性毒性
        2.4.2 土壤法測(cè)定DMP和DEP對(duì)蚯蚓的急性毒性
    2.5 分析討論
    2.6 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三章 DMP、DEP和DBP污染脅迫對(duì)蚯蚓生長(zhǎng)發(fā)育和組織酶活性的影響
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 受試生物
        3.1.2 供試土壤
        3.1.3 主要化學(xué)藥品
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 DMP、DEP和DBP單一污染對(duì)蚯蚓生長(zhǎng)發(fā)育的影響
            3.2.1.1 濃度設(shè)計(jì)
            3.2.1.2 蚯蚓染毒
        3.2.2 DMP、DEP和DBP單一污染對(duì)蚯蚓組織酶活性的影響
            3.2.2.1 濃度設(shè)計(jì)
            3.2.2.2 蚯蚓污染暴露
            3.2.2.3 制備勻漿緩沖液樣品
        3.2.3 蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
            3.2.3.1 蛋白含量測(cè)定的原理
            3.2.3.2 蛋白含量測(cè)定的溶液配制
            3.2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
        3.2.4 樣品提取液中蛋白濃度的測(cè)定
        3.2.5 酶活的測(cè)定
    3.3 數(shù)據(jù)分析
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 DMP、DEP和DBP單一污染情況下蚯蚓的體重變化
        3.4.2 蛋白質(zhì)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.4.3 DMP、DEP和DBP單一污染對(duì)蚯蚓體內(nèi)SOD、CAT、AChE活性影響
    3.5 分析與討論
    3.6 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第四章 DMP、DEP和DBP對(duì)蚯蚓體腔細(xì)胞溶酶體膜穩(wěn)定性的影響
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 受試生物
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 試驗(yàn)濃度設(shè)計(jì)
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.3 中性紅試驗(yàn)
            4.2.3.1 配制實(shí)驗(yàn)溶液
            4.2.3.2 提取蚯蚓體腔液
            4.2.3.3 中性紅染色和記錄中性保留時(shí)間
    4.3 數(shù)據(jù)分析
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 DMP單一污染對(duì)蚯蚓體腔細(xì)胞溶酶體膜穩(wěn)定性的影響
        4.4.2 DEP單一污染對(duì)蚯蚓體腔細(xì)胞溶酶體膜穩(wěn)定性的影響
        4.4.3 DBP單一污染對(duì)蚯蚓體腔細(xì)胞溶酶體膜穩(wěn)定性的影響
    4.5 分析討論
    4.6 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第五章 DMP、DEP、DBP的雌激素樣作用研究
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        5.1.2 主要藥品與試劑
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)分組
        5.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)、傳代、凍存和復(fù)蘇
        5.2.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        5.2.4 MTT比色法
            5.2.4.1 溶液和藥物配制
            5.2.4.2 接種細(xì)胞和暴露處理
            5.2.4.3 檢測(cè)細(xì)胞活力
        5.2.5 RT-qPCR檢測(cè)基因表達(dá)
            5.2.5.1 接種細(xì)胞和暴露處理
            5.2.5.2 細(xì)胞的總RNA提取
            5.2.5.3 細(xì)胞RNA濃度測(cè)定
            5.2.5.4 反轉(zhuǎn)錄制備細(xì)胞cDNA
            5.2.5.5 PCR擴(kuò)增反應(yīng)
    5.3 數(shù)據(jù)處理
    5.4 結(jié)果
        5.4.1 DMP、DEP、DBP對(duì)MCF-7細(xì)胞活力的影響
        5.4.2 DMP、DEP、DBP對(duì)MCF-7細(xì)胞雌激素受體基因表達(dá)的影響
    5.5 分析討論
    5.6 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文的情況



本文編號(hào)：3931653