海洋約占地球表面積的四分之三，為人類提供了豐富的資源，對人類社會的存在和發(fā)展具有非常重大的意義。然而，隨著人類對海洋資源的不合理開發(fā)利用，使海洋污染日益嚴(yán)重，對人類的危害也愈發(fā)明顯。在眾多的污染源中，石油是一個不可忽視的元素。2011年渤海蓬萊19-3油田溢油事故，共造成劣四類（劣于國家海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)中四類海水水質(zhì)）海水面積870平方公里，對渤海生態(tài)系統(tǒng)造成了極大危害。 生物修復(fù)是治理海洋石油污染的重要方法之一，其中高效石油降解菌在生物修復(fù)中起著舉足輕重的作用。細(xì)菌中的石油烴降解酶類能夠催化降解石油中的烴類成為小分子物質(zhì)并以此作為生長所需的碳源和能源。烷烴羥化酶AlkB、細(xì)胞色素P450和黃素結(jié)合蛋白AlmA是目前研究較為廣泛的石油降解酶，能夠催化烷烴降解的起始反應(yīng)。其中AlkB和P450主要催化短中碳鏈的烷烴，但兩者降解底物有一部分不重疊，而AlmA主要降解長鏈烷烴。 為獲得高效石油降解菌并對其石油烴降解酶基因進(jìn)行分析，本研究以渤海石油污染區(qū)沉積物為材料篩選石油降解菌群，共分離到24株菌，包括18株細(xì)菌和6株真菌；結(jié)合實驗室菌種庫中的石油降解相關(guān)菌株，對其石油降解率利用紫外分光光度法進(jìn)...

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 海洋石油污染
        1.1.1 石油
        1.1.2 石油成分
        1.1.3 海洋石油污染現(xiàn)狀
        1.1.4 海洋石油污染危害
        1.1.5 石油入海后的行為及歸宿
        1.1.6 海洋石油污染的生物修復(fù)
    1.2 微生物多樣性及其功能基因的研究方法
        1.2.1 微生物多樣性研究的傳統(tǒng)方法和現(xiàn)代方法
        1.2.2 分子生物學(xué)技術(shù)在海洋微生物功能基因研究中的應(yīng)用
    1.3 海洋石油烴微生物降解途徑及其種群多樣性
        1.3.1 石油烴類化合物的微生物代謝途徑
        1.3.2 海洋石油烴降解微生物的研究進(jìn)展
    1.4 烷烴降解酶
        1.4.1 烷烴降解酶系統(tǒng)的多樣性
        1.4.2 烷烴降解酶的研究進(jìn)展
    1.5 本論文的研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 材料來源
        2.1.2 試劑和藥品
        2.1.3 分子生物學(xué)用酶
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 培養(yǎng)基和溶液
        2.1.6 引物
        2.1.7 分析軟件
    2.2 海洋石油菌的篩選
    2.3 海洋石油降解菌石油降解率的粗篩
        2.3.1 石油降解菌的培養(yǎng)方法
        2.3.2 石油降解率的測定
    2.4 石油降解菌的鑒定和系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
        2.4.1 細(xì)菌 DNA 的提取
        2.4.2 石油降解菌 16S rDNA 鑒定及其系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
    2.5 細(xì)菌質(zhì)粒的提取
    2.6 石油降解菌石油烴降解酶基因的擴增和分析
    2.7 高城郡海桿菌 WSL01 和耐鹽芽孢桿菌 WH072 功能基因的擴增與分析
    2.8 高城郡海桿菌 WSL01 p450 基因的異源表達(dá)
3 實驗結(jié)果
    3.1 渤海溢油區(qū)沉積物石油降解菌的分離
    3.2 渤海溢油區(qū)沉積物分離菌的鑒定和多樣性分析
        3.2.1 渤海溢油區(qū)沉積物分離菌株石油降解率的粗篩
        3.2.2 高效石油降解菌的系統(tǒng)進(jìn)化分析
        3.2.3 石油降解菌的多樣性分析
    3.3 石油降解菌質(zhì)粒的提取
    3.4 石油降解菌石油烴降解酶基因的擴增與分析
        3.4.1 烷烴羥化酶基因 alkB
        3.4.2 細(xì)胞色素 p450 基因
        3.4.3 黃素結(jié)合蛋白基因 almA
    3.5 高城郡海桿菌 WSL01 和耐鹽芽孢桿菌 WH072 功能基因的擴增與分析
    3.6 高城郡海桿菌 WSL01 p450 基因的異源表達(dá)
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄



本文編號：3846057