本文關(guān)鍵詞：小菜蛾過氧化物還原酶基因的鑒定及其功能研究

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【摘要】：過氧化物還原酶(Peroxiredoxins,Prxs)是廣泛存在于真核生物和原核生物中的一個過氧化物酶超家族,其抗氧化作用對生物體是至關(guān)重要的。有關(guān)昆蟲的Prx基因已有報道,但是小菜蛾的Prx基因家族還沒有完整的研究報道。本研究克隆了小菜蛾的4個過氧化物還原酶基因分別為PxPrx1、PxPrx3、 PxPrx5、PxPrx6,其中PxPrx1、PxPrx3屬于典型的2-Cys Prxs；PxPrx5屬于非典型的2-Cys Prxs；PxPrx6屬于1-Cys Prxs。進化樹分析表明這4個基因與其他昆蟲的Prx基因親緣關(guān)系密切。本研究使用熒光定量PCR分析了PxPrx1、PxPrx3、PxPrx5和PxPrx6在小菜蛾不同發(fā)育階段的表達水平,結(jié)果表明PxPrx1和Px Prx5均在蛹期和成蟲期高表達：PxPrx3在幼蟲期和成蟲期高表達,而在蛹期低表達；PxPrx6在成蟲期高表達。比較小菜蛾敏感品系、毒死蜱抗性品系和氟蟲腈抗性品系3齡幼蟲中4個Prx基因的表達量,除了PxPrx1在2個抗性品系中高表達外,其他3個基因并沒有顯著的差異性表達。比較小菜蛾馬氏管、中腸、頭部、表皮以及脂肪體中Prxs基因的相對表達量,發(fā)現(xiàn)PxPrx1、PxPrx6和PxPrx5在馬氏管表達量高,PxPrx3在5個組織中的表達量無明顯差異。比較4個Prx基因在小菜蛾齡期以及組織中的表達量,發(fā)現(xiàn)PxPrx6的表達量遠低于其他3個基因,而其余3個基因的總體表達量相近。本研究還進行了小菜蛾冷、熱、紫外(UV)照射、過氧化氫以及殺蟲劑處理后,4個Prx基因的表達變化。選取特異性表達的基因PxPrx3和PxPrx5進行RNA干擾,結(jié)果表明基因的表達在24 h受到明顯的抑制。用UV處理小菜蛾2h后,注射dsGFP組的PxPrx3的表達量都顯著高于對照組和注射dsPxPrx3組;用熱處理小菜蛾2h后,注射寸dsPxPrx3組的PxPrx3的表達量都顯著高于對照組和注射dsGFP組。用UV處理小菜蛾2h后,注射dsGFP組的PxPrx5的表達量顯著低于對照組；用熱處理小菜蛾2h后,注射dsGFP組的PxPrx5的表達量顯著低于對照組。由此可見,PxPrxs能夠在一定程度上保護小菜蛾免受氧化損傷,但PxPrxs的轉(zhuǎn)錄調(diào)控水平是多樣的,取決于PxPrx s的類型和壓力的強度。
【關(guān)鍵詞】：小菜蛾 過氧化物還原酶 氧化壓力 熒光定量PCR RNA干擾
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S433.4
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 1 前言12-18
• 1.1 小菜蛾的危害性12
• 1.2 過氧化物還原酶的發(fā)現(xiàn)與分類12-14
• 1.3 過氧化物還原酶的抗氧化機制14-15
• 1.4 昆蟲中過氧化物還原酶序列的特性15-16
• 1.5 昆蟲過氧化物還原酶基因的功能研究16-18
• 1.5.1 過氧化物還原酶存在的部位及其角色16-17
• 1.5.2 過氧化物還原酶基因的應(yīng)激表達17-18
• 2 材料與方法18-28
• 2.1 供試蟲源18
• 2.2 主要試劑18
• 2.3 主要儀器18-19
• 2.4 試驗方法19-20
• 2.4.1 小菜蛾總RNA的提取19-20
• 2.4.2 合成cDNA20
• 2.5 PCR產(chǎn)物回收、克隆與測序20-23
• 2.5.1 PCR及產(chǎn)物回收20-22
• 2.5.2 目的片段與T載體連接與轉(zhuǎn)化22-23
• 2.5.2.1 制備感受態(tài)細胞22
• 2.5.2.2 連接和轉(zhuǎn)化22-23
• 2.6 小菜蛾與其他昆蟲的過氧化物還原酶進化樹分析23-24
• 2.7 小菜蛾過氧化物還原酶基因的表達譜分析24
• 2.8 不同發(fā)育階段、組織及不同脅迫下小菜蛾過氧化物還原酶基因的表達量測定24-26
• 2.8.1 小菜蛾不同齡期樣品收集24
• 2.8.2 小菜蛾不同組織樣品收集24
• 2.8.3 不同環(huán)境因子脅迫下小菜蛾過氧化物還原酶基因應(yīng)激表達量的測定24-26
• 2.8.3.1 溫度處理24-25
• 2.8.3.2 紫外線(UV)照射處理25
• 2.8.3.3 過氧化氫(H_2O_2)處理25
• 2.8.3.4 殺蟲劑處理25-26
• 2.9 挑選特異性表達的小菜蛾過氧化物還原酶基因進行RNA干擾26-27
• 2.10 熒光定量PCR測定小菜蛾過氧化物還原酶基因相對的表達量27
• 2.11 數(shù)據(jù)分析27-28
• 3 結(jié)果與分析28-45
• 3.1 小菜蛾過氧化物還原酶基因全長cDNA的克隆與分析28-32
• 3.1.1 PxPrx1全長cDNA的克隆28-29
• 3.1.2 PxPrx3全長cDNA的克隆29-30
• 3.1.3 PxPrx5全長cDNA的克隆30-31
• 3.1.4 PxPrx6全長cDNA的克隆31-32
• 3.2 小菜蛾與其他昆蟲過氧化物還原酶的同源性分析32-34
• 3.3 小菜蛾過氧化物還原酶基因的表達譜分析34-35
• 3.4 小菜蛾過氧化物還原酶基因在不同發(fā)育階段、不同品系的表達量分析35-36
• 3.5 小菜蛾過氧化物還原酶基因在不同組織的表達量分析36-37
• 3.6 不同環(huán)境因子脅迫下小菜蛾過氧化物還原酶基因應(yīng)激表達量的測定37-43
• 3.6.1 溫度處理37-40
• 3.6.1.1 冷處理37-38
• 3.6.1.2 室溫(25℃)對照組38-39
• 3.6.1.3 熱處理39-40
• 3.6.2 紫外(UV)照射處理40-41
• 3.6.3 過氧化氫(H_2O_2)處理41-42
• 3.6.4 殺蟲劑處理42-43
• 3.7 RNA干擾后小菜蛾過氧化物還原酶基因表達變化43-45
• 3.7.1 RNA干擾PxPrx343-44
• 3.7.2 RNA干擾PxPrx544-45
• 4 總結(jié)與討論45-48
• 參考文獻48-53
• 附錄 基因克隆中PCR反應(yīng)條件53-54
• 致謝54

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李惠明;小菜蛾發(fā)生規(guī)律與氣象要素的研究[J];植保技術(shù)與推廣;1995年06期

2 杜曉蕓,杜志斌,李炳成;內(nèi)蒙古烏盟地區(qū)小菜蛾的防治[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè);2000年05期

3 趙紅梅 ,李棟 ,蘇翠萍;杜邦安達防治小菜蛾試驗[J];新農(nóng)業(yè);2002年08期

4 ;小菜蛾防治三法[J];農(nóng)藥市場信息;2002年09期

5 楊德良,瞿忠南;百草一號對小菜蛾的防治效果[J];長江蔬菜;2003年06期

6 黃濤生;一套菜農(nóng)易于操作的小菜蛾防治配套技術(shù)[J];蔬菜;2003年10期

7 劉漢才,胡仁火,徐汪;咸寧市小菜蛾的發(fā)生規(guī)律及防治方法[J];咸寧學(xué)院學(xué)報;2003年03期

8 劉曉聲;小菜蛾的發(fā)生及防治措施[J];安徽農(nóng)業(yè);2004年03期

9 潘勝屏;對付小菜蛾 選用新“武器”[J];農(nóng)家參謀;2004年06期

10 尤占武;防治抗性小菜蛾的苦皮素[J];吉林蔬菜;2004年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李廣宏;朱應(yīng);蔡汪洋;孟小林;梁東瑞;;小菜蛾半合成飼料的研究[A];全國生物防治學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];1995年

2 李仲惺;周學(xué)杰;吳永漢;;浙江南部小菜蛾代次劃分探討[A];保護地農(nóng)作物有害生物綜合治理技術(shù)[C];2005年

3 尤民生;岳震;何瑋毅;楊鑫華;楊廣;謝苗;詹東亮;;小菜蛾基因組研究[A];首屆“全國青年昆蟲學(xué)科技工作者創(chuàng)新論壇”論文摘要集[C];2012年

4 王建軍;韓召軍;王蔭長;;小菜蛾鈉離子通道基因片段的克隆和序列分析(摘要)[A];紀念六足學(xué)會創(chuàng)建八十周年、江蘇省昆蟲學(xué)會四十周年論文集粹[C];2000年

5 呂利華;何余容;龐雄飛;馮夏;陳煥愉;;一種小菜蛾蟲霉菌的研究初報[A];走向21世紀的中國昆蟲學(xué)——中國昆蟲學(xué)會2000年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2000年

6 趙鋒;李建洪;;小菜蛾抗藥性研究進展[A];第三屆湖北湖南植保農(nóng)藥學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

7 李仲惺;;小菜蛾防治“難”的原因分析及對策[A];保護地農(nóng)作物有害生物綜合治理技術(shù)[C];2005年

8 李向永;趙雪晴;尹艷瓊;陳宗麒;諶愛東;;云南小菜蛾種群發(fā)生特點及其成災(zāi)原因[A];“創(chuàng)新驅(qū)動與現(xiàn)代植保”——中國植物保護學(xué)會第十一次全國會員代表大會暨2013年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2013年

9 羅雁婕;吳文偉;浦恩堂;尹可鎖;何成興;郭志祥;;云南小菜蛾抗藥性衰退測定[A];云南省昆蟲學(xué)會2009年年會論文集[C];2009年

10 包華理;陳偉平;虞皓;王少毅;何文彪;;廣州地區(qū)小菜蛾發(fā)生量預(yù)測模型研究[A];農(nóng)業(yè)生物災(zāi)害預(yù)防與控制研究[C];2005年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林勇文 余德億;小菜蛾綜合防治技術(shù)[N];福建科技報;2005年

2 ;小菜蛾的發(fā)生與防治技術(shù)[N];瓜果蔬菜報.農(nóng)業(yè)信息周刊;2006年

3 本報記者;小菜蛾中等偏重發(fā)生[N];瓜果蔬菜報.農(nóng)業(yè)信息周刊;2007年

4 ;小菜蛾的發(fā)生與防治技術(shù)[N];瓜果蔬菜報.農(nóng)業(yè)信息周刊;2007年

5 安格諾 王小杰;小菜蛾的防治技術(shù)[N];河北農(nóng)民報;2006年

6 通訊員 雷旭東 陳棟賢 記者 吳鶴年;小菜蛾：看你如何再猖獗[N];科技日報;2002年

7 承德市蔬菜研究所 董克良 陶秀娟 房慶國;小菜蛾無公害防治[N];河北科技報;2011年

8 華大;對付小菜蛾有殺手锏[N];廣東科技報;2001年

9 盛堆;小菜蛾的防治[N];云南科技報;2003年

10 記者 高建進;福建農(nóng)林大學(xué)專家破譯小菜蛾基因組[N];光明日報;2013年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 謝苗;氟蟲腈脅迫下小菜蛾生理生化及基因表達變化[D];福建農(nóng)林大學(xué);2011年

2 楊廣;十字花科蔬菜——小菜蛾——小菜蛾絨繭峰之間的相互作用[D];福建農(nóng)林大學(xué);2001年

3 王建軍;小菜蛾P(guān)lutella xylostella （L.）殺蟲劑靶標(biāo)抗性的分子生物學(xué)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

4 魏輝;植物次生物質(zhì)對小菜蛾控制作用的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2002年

5 陳崢;30種菊科植物提取物對小菜蛾的生物活性及次生物質(zhì)成分鑒定[D];福建農(nóng)林大學(xué);2009年

6 孫麗娜;小菜蛾和甜菜夜蛾魚尼丁受體基因克隆及分子藥理學(xué)研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

7 符偉;小菜蛾對Bt抗性機理及湖南地區(qū)綜合治理研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

8 Patcharaporn Vanichpakorn;[D];西南大學(xué);2010年

9 盧美光;小菜蛾對菊酯的kdr抗性機制及抗性的分子檢測方法研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

10 龔佑靜;小菜蛾對Bt毒素Cry1Ac抗性的生化與分子機理[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳峰;小菜蛾hsp90和hsp20基因克隆及熱激表達研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

2 吳照力;小菜蛾hsp70基因克隆與表達的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

3 胡玉蘭;小菜蛾對毒死蜱抗性的遺傳方式及連鎖圖譜構(gòu)建[D];福建農(nóng)林大學(xué);2012年

4 李廣閱;雙酰胺類殺蟲劑抗性與敏感品系小菜蛾差異性cDNA及魚尼丁受體基因分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 馬鑫;春甘藍田小菜蛾種群動態(tài)及時空生態(tài)位研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 劉揚;幾種藥劑及其混用對春甘藍田小菜蛾及節(jié)肢動物群落的影響[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

7 蔣田田;小菜蛾的抗藥性監(jiān)測以及對唑蟲酰胺的抗性風(fēng)險評估[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

8 李建玉;小菜蛾過氧化物還原酶基因的鑒定及其功能研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2015年

9 蘇曉t，

本文編號：922568