本文關鍵詞：影響MP1和GMPR2基因在遼寧絨山羊皮膚中表達的研究

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【摘要】：本實驗旨在研究調控MP1與GMPR2基因在皮膚中表達的影響因素與機制,希望以此了解毛囊細胞的形成與周期發(fā)育,對進一步選育遼寧絨山羊提供建設性意見及幫助。首先制備Noggin基因的RNA干擾載體并且感染羊皮膚傳代細胞,然后利用成纖維細胞生長因子和類胰島素細胞生長因子與褪黑激素既單獨又聯(lián)合處理羊皮膚細胞,最后通過Thermal Cycler DiceTM System Software計算分析出MP1和GMPR2基因的相對表達量。實驗結果如下:(1)慢病毒的最佳MOI值為30,并且需要添加polybrene助染劑增強感染效率。(2)成功構建Lenti-Noggin-EGFP-mi R慢病毒后,經過計算滴度為1.35×106Tu/ml。(3)GMPR2基因在Noggin干擾組的相對表達量最低,而在陰性對照組中最高。(4)褪黑激素處理羊成纖維細胞結果顯示,MP1基因的表達被抑制,但隨著藥物處理時間的延長,抑制效果被削弱。(5)FGF5處理羊成纖維細胞時,MP1與GMPR2基因在分時段表達差異非常顯著,其中24小時10-6g/L和48小時10-5g/L分別出現(xiàn)最大值。(6)IGF-1處理羊成纖維細胞,目的基因MP1隨著藥物處理時間延長,濃度降低,基因表達的抑制程度逐漸降低,而GMPR2基因在10-4g/L 72小時出現(xiàn)最大值。(7)協(xié)同實驗證明褪黑激素與任何一種外源蛋白聯(lián)合使用均可以促進兩種基因的表達,其中與FGF5協(xié)同作用效果更顯著。結論:(1)BMP信號通路負調控GMPR2基因的表達。(2)褪黑激素對FGF5具有正相關調控作用,協(xié)同使用可以促進兩個目的基因的表達。這為進一步研究細胞因子與褪黑激素對目的基因表達的作用機制提供數(shù)據(jù)支持,以及對絨毛性狀的影響提供理論基礎。
【關鍵詞】：MP1 GMPR2 FGF5 Noggin IGF-1 慢病毒
【學位授予單位】：遼寧師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S827
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 1.背景7-12
• 1.1 遼寧絨山羊的概述7
• 1.2 遼寧絨山羊基因的部分研究進展7-8
• 1.2.1 MAPK信號通路及支架蛋白7-8
• 1.2.2 鳥甘酸還原酶 28
• 1.3 基因表達的研究方法8-9
• 1.3.1 RNA干擾8-9
• 1.3.2 慢病毒(Lentiviral vectors)載體9
• 1.4 影響毛發(fā)生長的主要因素9-11
• 1.4.1 褪黑激素(Melatonin,MT)9-10
• 1.4.2 成纖維細胞因子（Fibroblast Growth Factor，F(xiàn)GF5）10
• 1.4.3 類胰島素細胞因子（Insulinlike Growth Factor,IGF-1）10-11
• 1.5 研究目的及意義11-12
• 2.材料與方法12-22
• 2.1 材料12-13
• 2.2 方法13-22
• 2.2.1 遼寧絨山羊皮膚細胞培養(yǎng)13
• 2.2.2 摸索最佳MOI值13-14
• 2.2.3 Noggin基因干擾載體的構建14-17
• 2.2.4 Noggin基因干擾慢病毒的包裝、收集和滴度測定17-18
• 2.2.5 慢病毒感染遼寧絨山羊皮膚細胞18-20
• 2.2.6 外源蛋白處理遼寧絨山羊皮膚細胞20-22
• 3. 結果22-40
• 3.1 細胞培養(yǎng)22-23
• 3.2 最佳MOI值23-24
• 3.3 Noggin基因干擾載體的構建與鑒定24-27
• 3.4 Noggin基因干擾慢病毒包裝27-30
• 3.5 慢病毒感染遼寧絨山羊皮膚細胞30-32
• 3.6 MP1基因在遼寧絨山羊皮膚細胞中的表達32-36
• 3.7 GMPR2基因在皮膚中的表達分析36-40
• 4 討論40-43
• 結論43-44
• 參考文獻44-50
• 附錄A 質粒抽提方法50-51
• 附錄B goat ACTB內參基因、MP1和GMPR2基因曲線圖51-52
• 附錄C 病毒液感染后GMPR2的擴增曲線及溶解曲線52-53
• 附錄D MP1基因在MT組熒光定量的擴增曲線及溶解曲線53-56
• 附錄E MP1基因在FGF5組熒光定量的擴增曲線及溶解曲線56-59
• 附錄F GMPR2基因在FGF5組熒光定量的擴增曲線及溶解曲線59-62
• 附錄G MP1基因在IGF-1 組熒光定量的擴增曲線及溶解曲線62-65
• 附錄H GMPR2基因在IGF-1 組熒光定量的擴增曲線及溶解曲線65-68
• 附錄I 協(xié)同實驗組的擴增曲線及溶解曲線68-70
• 致謝70

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本文編號：915033