本文關(guān)鍵詞：影響MP1和GMPR2基因在遼寧絨山羊皮膚中表達(dá)的研究

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【摘要】：本實(shí)驗(yàn)旨在研究調(diào)控MP1與GMPR2基因在皮膚中表達(dá)的影響因素與機(jī)制,希望以此了解毛囊細(xì)胞的形成與周期發(fā)育,對(duì)進(jìn)一步選育遼寧絨山羊提供建設(shè)性意見及幫助。首先制備Noggin基因的RNA干擾載體并且感染羊皮膚傳代細(xì)胞,然后利用成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和類胰島素細(xì)胞生長(zhǎng)因子與褪黑激素既單獨(dú)又聯(lián)合處理羊皮膚細(xì)胞,最后通過Thermal Cycler DiceTM System Software計(jì)算分析出MP1和GMPR2基因的相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)慢病毒的最佳MOI值為30,并且需要添加polybrene助染劑增強(qiáng)感染效率。(2)成功構(gòu)建Lenti-Noggin-EGFP-mi R慢病毒后,經(jīng)過計(jì)算滴度為1.35×106Tu/ml。(3)GMPR2基因在Noggin干擾組的相對(duì)表達(dá)量最低,而在陰性對(duì)照組中最高。(4)褪黑激素處理羊成纖維細(xì)胞結(jié)果顯示,MP1基因的表達(dá)被抑制,但隨著藥物處理時(shí)間的延長(zhǎng),抑制效果被削弱。(5)FGF5處理羊成纖維細(xì)胞時(shí),MP1與GMPR2基因在分時(shí)段表達(dá)差異非常顯著,其中24小時(shí)10-6g/L和48小時(shí)10-5g/L分別出現(xiàn)最大值。(6)IGF-1處理羊成纖維細(xì)胞,目的基因MP1隨著藥物處理時(shí)間延長(zhǎng),濃度降低,基因表達(dá)的抑制程度逐漸降低,而GMPR2基因在10-4g/L 72小時(shí)出現(xiàn)最大值。(7)協(xié)同實(shí)驗(yàn)證明褪黑激素與任何一種外源蛋白聯(lián)合使用均可以促進(jìn)兩種基因的表達(dá),其中與FGF5協(xié)同作用效果更顯著。結(jié)論:(1)BMP信號(hào)通路負(fù)調(diào)控GMPR2基因的表達(dá)。(2)褪黑激素對(duì)FGF5具有正相關(guān)調(diào)控作用,協(xié)同使用可以促進(jìn)兩個(gè)目的基因的表達(dá)。這為進(jìn)一步研究細(xì)胞因子與褪黑激素對(duì)目的基因表達(dá)的作用機(jī)制提供數(shù)據(jù)支持,以及對(duì)絨毛性狀的影響提供理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：MP1 GMPR2 FGF5 Noggin IGF-1 慢病毒
【學(xué)位授予單位】：遼寧師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S827
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 1.背景7-12
• 1.1 遼寧絨山羊的概述7
• 1.2 遼寧絨山羊基因的部分研究進(jìn)展7-8
• 1.2.1 MAPK信號(hào)通路及支架蛋白7-8
• 1.2.2 鳥甘酸還原酶 28
• 1.3 基因表達(dá)的研究方法8-9
• 1.3.1 RNA干擾8-9
• 1.3.2 慢病毒(Lentiviral vectors)載體9
• 1.4 影響毛發(fā)生長(zhǎng)的主要因素9-11
• 1.4.1 褪黑激素(Melatonin,MT)9-10
• 1.4.2 成纖維細(xì)胞因子（Fibroblast Growth Factor，F(xiàn)GF5）10
• 1.4.3 類胰島素細(xì)胞因子（Insulinlike Growth Factor,IGF-1）10-11
• 1.5 研究目的及意義11-12
• 2.材料與方法12-22
• 2.1 材料12-13
• 2.2 方法13-22
• 2.2.1 遼寧絨山羊皮膚細(xì)胞培養(yǎng)13
• 2.2.2 摸索最佳MOI值13-14
• 2.2.3 Noggin基因干擾載體的構(gòu)建14-17
• 2.2.4 Noggin基因干擾慢病毒的包裝、收集和滴度測(cè)定17-18
• 2.2.5 慢病毒感染遼寧絨山羊皮膚細(xì)胞18-20
• 2.2.6 外源蛋白處理遼寧絨山羊皮膚細(xì)胞20-22
• 3. 結(jié)果22-40
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)22-23
• 3.2 最佳MOI值23-24
• 3.3 Noggin基因干擾載體的構(gòu)建與鑒定24-27
• 3.4 Noggin基因干擾慢病毒包裝27-30
• 3.5 慢病毒感染遼寧絨山羊皮膚細(xì)胞30-32
• 3.6 MP1基因在遼寧絨山羊皮膚細(xì)胞中的表達(dá)32-36
• 3.7 GMPR2基因在皮膚中的表達(dá)分析36-40
• 4 討論40-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 附錄A 質(zhì)粒抽提方法50-51
• 附錄B goat ACTB內(nèi)參基因、MP1和GMPR2基因曲線圖51-52
• 附錄C 病毒液感染后GMPR2的擴(kuò)增曲線及溶解曲線52-53
• 附錄D MP1基因在MT組熒光定量的擴(kuò)增曲線及溶解曲線53-56
• 附錄E MP1基因在FGF5組熒光定量的擴(kuò)增曲線及溶解曲線56-59
• 附錄F GMPR2基因在FGF5組熒光定量的擴(kuò)增曲線及溶解曲線59-62
• 附錄G MP1基因在IGF-1 組熒光定量的擴(kuò)增曲線及溶解曲線62-65
• 附錄H GMPR2基因在IGF-1 組熒光定量的擴(kuò)增曲線及溶解曲線65-68
• 附錄I 協(xié)同實(shí)驗(yàn)組的擴(kuò)增曲線及溶解曲線68-70
• 致謝70

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本文編號(hào)：915033