目的:分離純化藥用植物北桑寄生的內(nèi)生真菌,對其進行形態(tài)學和分子生物學鑒定;篩選氧化自由基清除能力較強和抑菌效果較好的高活性菌株;大規(guī)模發(fā)酵活性菌株獲得其乙酸乙酯部分提取物,對活性菌株的次級代謝產(chǎn)物進行分離及鑒定以及活性分析,為北桑寄生內(nèi)生真菌資源的開發(fā)和利用提供參考依據(jù)。方法:（1）設(shè)置不同消毒時間和不同濃度的次氯酸鈉溶液對北桑寄生葉片進行表面消毒處理,采用組織塊法分離北桑寄生內(nèi)生真菌,菌絲尖端挑取法對其進行純化,利用形態(tài)學結(jié)合ITS序列比對鑒定內(nèi)生真菌。（2）小規(guī)模液體發(fā)酵北桑寄生內(nèi)生真菌,乙酸乙酯萃取內(nèi)生真菌發(fā)酵液,減壓濃縮得提取物,測定其DPPH自由基清除活性和ABTS⁺自由基清除活性。（3）進一步篩選具有抑菌活性的菌株,采用濾紙片瓊脂擴散法進行抑菌活性菌株的初篩,96孔板法測定初篩后具有抑菌活性菌株的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）。（4）對活性菌株進行大規(guī)模的液體發(fā)酵培養(yǎng),采用柱色譜等方法分離其次級代謝產(chǎn)物,運用波譜學對單體化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定,測定單體化合物的抗氧化活性和抑菌活性。結(jié)果:（1）北桑寄生葉片消毒條件為:75%的乙醇浸泡消毒1 ... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

北桑寄生（左圖）及其葉片（右圖）

山西醫(yī)科大學碩士學位論文16圖2-1結(jié)果表明，樣品濃度在0.02~0.2mg/mL時，北桑寄生內(nèi)生真菌BS06、BS07、BS27的發(fā)酵液提取物對DPPH自由基清除率為19.06%~95.17%，內(nèi)生真菌BS27的發(fā)酵產(chǎn)物對DPPH自由基的清除能力較好，濃度為0.2mg/mL時，清除率達到95.17%，接近于同等濃度下Vc對DPPH自由基的清除能力。圖2-1內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物對DPPH自由基的清除活性2.2ABTS+自由基清除結(jié)果圖2-2結(jié)果表明，樣品濃度在0.02~0.2mg/mL時，北桑寄生內(nèi)生真菌BS06、BS07、BS27的發(fā)酵液提取物對ABTS+自由基清除率為7.23%~50.05%，內(nèi)生真菌BS27的發(fā)酵產(chǎn)物對ABTS+自由基的清除能力較好，濃度為0.2mg/mL時，清除率達到50.05%。圖2-2內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物對ABTS+自由基的清除活性

山西醫(yī)科大學碩士學位論文16圖2-1結(jié)果表明，樣品濃度在0.02~0.2mg/mL時，北桑寄生內(nèi)生真菌BS06、BS07、BS27的發(fā)酵液提取物對DPPH自由基清除率為19.06%~95.17%，內(nèi)生真菌BS27的發(fā)酵產(chǎn)物對DPPH自由基的清除能力較好，濃度為0.2mg/mL時，清除率達到95.17%，接近于同等濃度下Vc對DPPH自由基的清除能力。圖2-1內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物對DPPH自由基的清除活性2.2ABTS+自由基清除結(jié)果圖2-2結(jié)果表明，樣品濃度在0.02~0.2mg/mL時，北桑寄生內(nèi)生真菌BS06、BS07、BS27的發(fā)酵液提取物對ABTS+自由基清除率為7.23%~50.05%，內(nèi)生真菌BS27的發(fā)酵產(chǎn)物對ABTS+自由基的清除能力較好，濃度為0.2mg/mL時，清除率達到50.05%。圖2-2內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物對ABTS+自由基的清除活性

【參考文獻】：
期刊論文
[1]不同碳源對內(nèi)生真菌Shiraia sp. Slf14產(chǎn)苝醌類色素的影響[J]. 湯麗娟,包建瑩,顏日明,汪涯,楊慧林,張志斌,朱篤.  江西師范大學學報(自然科學版). 2019(05)
[2]不同產(chǎn)地甘草內(nèi)生真菌多樣性及分離條件研究[J]. 陳靜,許貞,張雪,李妍芃,劉春生.  藥學學報. 2019(02)
[3]檀香內(nèi)生真菌多樣性及其抗菌與促生特性的研究[J]. 劉軍,劉艷明,徐在超,王卓婭,黃雅麗,鄧祖軍.  中國中藥雜志. 2018(17)
[4]內(nèi)生真菌Alternaria tenuissima PC-005抗耐藥菌活性成分研究[J]. 劉俊,張春雷,張青艷,周孟,王兵,徐國波.  中南藥學. 2018(06)
[5]植物內(nèi)生菌活性代謝產(chǎn)物最新研究進展[J]. 靳錦,趙慶,張曉梅,李文均.  微生物學雜志. 2018(03)
[6]秦艽內(nèi)生真菌Alternaria alternata QJ15的生長特性及抗氧化活性研究[J]. 羅琴,李水琴,國鈺環(huán),趙歡,魏超,彭正松.  華西藥學雜志. 2018(02)
[7]毛頭鬼傘子實體化學成分及抗糖尿病活性初探[J]. 胡亞平,張丙乾,張金秀,趙立強,王立安.  菌物學報. 2018(03)
[8]內(nèi)生菌在天然藥物研究中的研究進展[J]. 楊志軍,鄧毅,曼瓊,楊秀娟,楊延澤.  中國臨床藥理學雜志. 2018(05)
[9]內(nèi)生真菌鏈格孢菌醋酸乙酯提取物對金黃色葡萄球菌抑菌機制的研究[J]. 王永剛,楊光瑞,陳凱,王鳴剛,冷非凡,楊明俊,田艷花.  中草藥. 2018(03)
[10]藥用植物內(nèi)生真菌研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢[J]. 郭順星.  菌物學報. 2018(01)

博士論文
[1]越南槐內(nèi)生真菌多樣性、抑菌活性及其次生代謝產(chǎn)物研究[D]. 姚裕群.廣西大學 2017
[2]海南粗榧內(nèi)生真菌CH1307主要次級代謝產(chǎn)物的研究[D]. 胡曉蘋.海南大學 2016
[3]黃獨和腺梗豨薟內(nèi)生真菌蕓薹生鏈格孢化學成分及藥理活性研究[D]. 湯瑩.華中科技大學 2015
[4]銀杏內(nèi)生真菌的分離鑒定及代謝產(chǎn)物抑菌活性研究[D]. 柏鈺.安徽農(nóng)業(yè)大學 2015
[5]三株海洋微生物中胞外多糖的分離、結(jié)構(gòu)和抗氧化活性研究[D]. 孫海紅.中國海洋大學 2009

碩士論文
[1]紫草素抗氧化和抑制酪氨酸酶活性研究[D]. 魏夢濤.江西中醫(yī)藥大學 2019
[2]金線蓮內(nèi)生真菌促進宿主生長代謝及增強抗病性作用研究[D]. 葉冰竹.中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學 2019
[3]內(nèi)生真菌鏈格孢屬F1產(chǎn)胞外多糖培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的優(yōu)化及多糖特性的研究[D]. 李亮（lormoua KIATOUKOSIN）.蘭州理工大學 2019
[4]毛泡桐內(nèi)生真菌的分離、鑒定及菌株KLBMP-Pt686代謝產(chǎn)物的研究[D]. 張健.江蘇師范大學 2018
[5]羅漢果果實內(nèi)生真菌的分離及其抗氧化活性研究[D]. 范彩琴.廣西師范大學 2018
[6]沙棘籽油、果油、全果油抗氧化活性研究[D]. 鄭滿榮.天津科技大學 2018
[7]砂引草內(nèi)生菌多樣性及一株內(nèi)生菌Alternaria sp. P8次級代謝產(chǎn)物研究[D]. 田雪瑩.中國農(nóng)業(yè)科學院 2018
[8]竹葉蘭內(nèi)生菌的分離鑒定及生物活性研究[D]. 湯冰雪.華南理工大學 2018
[9]貝加爾唐松草內(nèi)生真菌的分離純化及其次級代謝產(chǎn)物生物活性研究[D]. 康銀霞.蘭州理工大學 2017
[10]甘蔗葉產(chǎn)黃酮內(nèi)生真菌的篩選與鑒定[D]. 周寧.廣西大學 2017



本文編號：3561114