發(fā)布時(shí)間：2021-03-04 20:40

　　犬新孢子蟲（Neospora caninum）簡稱新孢子蟲,是一種寄生在細(xì)胞內(nèi)的原蟲,宿主范圍非常廣泛。新孢子蟲表面蛋白SRS家族（SRSs）基因編碼新孢子蟲表面蛋白在介導(dǎo)蟲體對(duì)宿主細(xì)胞的粘附和入侵中發(fā)揮重要作用。細(xì)胞因子IL-18由多種組織的細(xì)胞產(chǎn)生,可以與IL-12產(chǎn)生協(xié)同作用,能誘導(dǎo)Th1細(xì)胞產(chǎn)生各種細(xì)胞因子,誘導(dǎo)NK細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒活性,促進(jìn)T細(xì)胞增殖。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)在新孢子蟲感染中宿主可通過介導(dǎo)IL-18的分泌使其促進(jìn)新孢子蟲清除,誘導(dǎo)分泌血清中的IFN-γ,促進(jìn)宿主對(duì)抗新孢子蟲感染免疫應(yīng)答過程中的Th1型。本研究擬在SRS家族中找出對(duì)抗新孢子蟲感染保護(hù)效果較好的蛋白,并驗(yàn)證IL-18作為佐劑是否可以增強(qiáng)重組蛋白的保護(hù)效果。為新孢子蟲疫苗進(jìn)一步的研制奠定基礎(chǔ)。新孢子蟲SRSs與小鼠IL-18及NcSRS2-mIL-18重組質(zhì)粒的構(gòu)建及蛋白表達(dá)表達(dá)通過生物信息學(xué)分析選取SRS2、SRS17以及SRS52共三個(gè)基因。擴(kuò)增得到新孢子蟲表面蛋白基因SRS2、SRS17、SRS52,大小分別為1041bp、1095bp、921bp,將結(jié)果進(jìn)行BLAST比對(duì),發(fā)現(xiàn)新孢子蟲SRS2、S... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

重組蛋白的SDS-PAGE分析

第二篇研究內(nèi)容第1章新孢子蟲SRSs，小鼠IL-18及NcSRS2-mIL-18的重組質(zhì)粒的構(gòu)建及蛋白表達(dá)19圖1.2重組蛋白的SDS-PAGE分析Fig.1.2SDS-PAGEanalysisofrecombinantproteinM：蛋白質(zhì)標(biāo)志物；1：誘導(dǎo)菌液；2：上清；3：沉淀；4：pET-32a載體菌液M:ProteinmolecularweightMarker;1InducedBacteria:;2:Thesupernatant;3:Thesediment;4:BacteriaofpET-32avector;1.3.3SRS2、SRS17、SRS52蛋白的純化用鎳柱對(duì)蛋白進(jìn)行純化，經(jīng)SDS-PAGE電泳鑒定條帶清晰且單一，如圖1.3。圖1.3重組蛋白的SDS-PAGE分析Fig.1.3SDS-PAGEanalysisofrecomBinantproteinM：蛋白質(zhì)標(biāo)志物；1：純化后的重組蛋白；M:ProteinmolecularweightMarker;1:PurifiedrecomBinantSRS2;2:PurifiedrecomBinantSRS17;3:PurifiedrecomBinantSRS52;M1M2M3

第二篇研究內(nèi)容第1章新孢子蟲SRSs，小鼠IL-18及NcSRS2-mIL-18的重組質(zhì)粒的構(gòu)建及蛋白表達(dá)201.3.4SRS2、SRS17、SRS52、mIL-18、NcSRS2-mIL-18重組蛋白的WesternBlot鑒定分別鼠抗His標(biāo)簽的單抗作為一抗將HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG作為二抗對(duì)重組蛋白進(jìn)行WesternBlot鑒定。結(jié)果顯示，條帶位置和SDS-PAGE相符合，如圖1.4。圖1.4重組蛋白WesternBlotting鑒定Fig.1.4WesternBlottinganalysisofrecomBinantproteinM：蛋白質(zhì)標(biāo)志物；1：誘導(dǎo)菌液；2：上清；3：沉淀；4：pET-32a載體菌液M:ProteinmolecularweightMarker;1InducedBacteria:;2:Thesupernatant;3:Thesediment;4:BacteriaofpET-32avector;1.4討論新孢子蟲是一種細(xì)胞內(nèi)寄生的原蟲，對(duì)新細(xì)胞入侵是其生存和繁殖的關(guān)鍵步驟[43]。新孢子蟲會(huì)分泌多種蛋白來介導(dǎo)其對(duì)宿主細(xì)胞的識(shí)別、黏附以及入侵過程[44]。這些蛋白有的可以協(xié)助蟲體運(yùn)輸分子、運(yùn)動(dòng)以及從宿主細(xì)胞中攝取營養(yǎng)[44]。近年來，研究者們對(duì)新孢子蟲的表面蛋白進(jìn)行了諸多的研究，它們?cè)谛骆咦酉x感染和侵入宿主細(xì)胞中發(fā)揮重要作用，并且也是一類可以誘導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng)的重要蛋白[45]。其中，研究發(fā)現(xiàn)NcSAG1和NcSRS2是新孢子蟲的重要表面蛋白，NcSAG1和NcSRS2都是新孢子蟲表面蛋白疫苗研究過程中的重要候選抗原。SAG1只在新孢子蟲緩殖子階段進(jìn)行表達(dá)。而SRS2則在新孢子蟲緩殖子以及速殖子兩個(gè)階段均有表達(dá)。且SRS2是一種跨膜蛋白。SRS2蛋白具有診斷和免疫方面的潛力[46]。盡管上述抗原具有較好的免疫保護(hù)性，迄今為止，尚沒有新孢子

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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