犬新孢子蟲（Neospora caninum）簡稱新孢子蟲,是一種寄生在細胞內(nèi)的原蟲,宿主范圍非常廣泛。新孢子蟲表面蛋白SRS家族（SRSs）基因編碼新孢子蟲表面蛋白在介導蟲體對宿主細胞的粘附和入侵中發(fā)揮重要作用。細胞因子IL-18由多種組織的細胞產(chǎn)生,可以與IL-12產(chǎn)生協(xié)同作用,能誘導Th1細胞產(chǎn)生各種細胞因子,誘導NK細胞產(chǎn)生細胞毒活性,促進T細胞增殖。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)在新孢子蟲感染中宿主可通過介導IL-18的分泌使其促進新孢子蟲清除,誘導分泌血清中的IFN-γ,促進宿主對抗新孢子蟲感染免疫應答過程中的Th1型。本研究擬在SRS家族中找出對抗新孢子蟲感染保護效果較好的蛋白,并驗證IL-18作為佐劑是否可以增強重組蛋白的保護效果。為新孢子蟲疫苗進一步的研制奠定基礎(chǔ)。新孢子蟲SRSs與小鼠IL-18及NcSRS2-mIL-18重組質(zhì)粒的構(gòu)建及蛋白表達表達通過生物信息學分析選取SRS2、SRS17以及SRS52共三個基因。擴增得到新孢子蟲表面蛋白基因SRS2、SRS17、SRS52,大小分別為1041bp、1095bp、921bp,將結(jié)果進行BLAST比對,發(fā)現(xiàn)新孢子蟲SRS2、S... 

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重組蛋白的SDS-PAGE分析

第二篇研究內(nèi)容第1章新孢子蟲SRSs，小鼠IL-18及NcSRS2-mIL-18的重組質(zhì)粒的構(gòu)建及蛋白表達19圖1.2重組蛋白的SDS-PAGE分析Fig.1.2SDS-PAGEanalysisofrecombinantproteinM：蛋白質(zhì)標志物；1：誘導菌液；2：上清；3：沉淀；4：pET-32a載體菌液M:ProteinmolecularweightMarker;1InducedBacteria:;2:Thesupernatant;3:Thesediment;4:BacteriaofpET-32avector;1.3.3SRS2、SRS17、SRS52蛋白的純化用鎳柱對蛋白進行純化，經(jīng)SDS-PAGE電泳鑒定條帶清晰且單一，如圖1.3。圖1.3重組蛋白的SDS-PAGE分析Fig.1.3SDS-PAGEanalysisofrecomBinantproteinM：蛋白質(zhì)標志物；1：純化后的重組蛋白；M:ProteinmolecularweightMarker;1:PurifiedrecomBinantSRS2;2:PurifiedrecomBinantSRS17;3:PurifiedrecomBinantSRS52;M1M2M3

第二篇研究內(nèi)容第1章新孢子蟲SRSs，小鼠IL-18及NcSRS2-mIL-18的重組質(zhì)粒的構(gòu)建及蛋白表達201.3.4SRS2、SRS17、SRS52、mIL-18、NcSRS2-mIL-18重組蛋白的WesternBlot鑒定分別鼠抗His標簽的單抗作為一抗將HRP標記的羊抗鼠IgG作為二抗對重組蛋白進行WesternBlot鑒定。結(jié)果顯示，條帶位置和SDS-PAGE相符合，如圖1.4。圖1.4重組蛋白WesternBlotting鑒定Fig.1.4WesternBlottinganalysisofrecomBinantproteinM：蛋白質(zhì)標志物；1：誘導菌液；2：上清；3：沉淀；4：pET-32a載體菌液M:ProteinmolecularweightMarker;1InducedBacteria:;2:Thesupernatant;3:Thesediment;4:BacteriaofpET-32avector;1.4討論新孢子蟲是一種細胞內(nèi)寄生的原蟲，對新細胞入侵是其生存和繁殖的關(guān)鍵步驟[43]。新孢子蟲會分泌多種蛋白來介導其對宿主細胞的識別、黏附以及入侵過程[44]。這些蛋白有的可以協(xié)助蟲體運輸分子、運動以及從宿主細胞中攝取營養(yǎng)[44]。近年來，研究者們對新孢子蟲的表面蛋白進行了諸多的研究，它們在新孢子蟲感染和侵入宿主細胞中發(fā)揮重要作用，并且也是一類可以誘導機體免疫反應的重要蛋白[45]。其中，研究發(fā)現(xiàn)NcSAG1和NcSRS2是新孢子蟲的重要表面蛋白，NcSAG1和NcSRS2都是新孢子蟲表面蛋白疫苗研究過程中的重要候選抗原。SAG1只在新孢子蟲緩殖子階段進行表達。而SRS2則在新孢子蟲緩殖子以及速殖子兩個階段均有表達。且SRS2是一種跨膜蛋白。SRS2蛋白具有診斷和免疫方面的潛力[46]。盡管上述抗原具有較好的免疫保護性，迄今為止，尚沒有新孢子

【參考文獻】：
期刊論文
[1]IL-18對pVAX1/SjRPS4·CB質(zhì)粒疫苗免疫小鼠抗日本血吸蟲感染的免疫調(diào)節(jié)作用[J]. 程紅兵,周云飛,張樹菊,汪世平,馮其梅,劉益萍,崔國艷,魏紅,李芬,劉明社.  中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2018(04)
[2]新孢子蟲NcSRS2和NcSAG1重組蛋白免疫小鼠誘導的免疫應答[J]. 劉夢麗,許正茂,吉爾格勒,張楊,巴音查汗.  中國動物傳染病學報. 2017(05)
[3]豬白細胞介素18基因的克隆及真核表達重組質(zhì)粒的構(gòu)建[J]. 石昂,時慶賀,李新果,王玉國,楊利,李雙雙,陳陸,王川慶.  中國畜牧獸醫(yī). 2017(09)
[4]豬IL-18增強豬細小病毒滅活疫苗豬體細胞免疫效果的研究[J]. 韓麗,何瀟湘,王瑞寧,曹貝貝,耿靜微,陳紅英,魏戰(zhàn)勇.  河南農(nóng)業(yè)大學學報. 2016(02)
[5]新孢子蟲抗原及疫苗研究進展[J]. 王雪,孟慶峰,劉新欣,王琪,姚貴哲,王偉利.  動物醫(yī)學進展. 2015(12)
[6]白細胞介素18研究進展[J]. 馬全英,祝秀梅,安芳蘭,武發(fā)菊,劉萍,劉學榮,張云德.  貴州畜牧獸醫(yī). 2014(02)
[7]新孢子蟲P0基因DNA疫苗免疫沙鼠誘導的免疫應答[J]. 高建偉,魯承,賈文影,許應天,宋建臣,杜秋明.  畜牧與獸醫(yī). 2012(04)
[8]表達PRRSV GP5、GP3和豬IL-18的重組雞痘病毒的構(gòu)建及鑒定[J]. 沈國順,金寧一,秦曉光,莊天中,尹榮蘭,馬鳴瀟.  中國生物制品學雜志. 2006(06)
[9]牛γ-干擾素在大腸桿菌與畢赤酵母中的表達及抗病毒活性比較[J]. 史喜菊,張燦,韓春來,夏春,汪明.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報. 2005(04)
[10]如何防治新孢子蟲病[J]. 劉群.  農(nóng)產(chǎn)品市場周刊. 2004(14)

博士論文
[1]NLRP3炎癥小體在抗新孢子蟲感染中的作用及其機制[D]. 王曉岑.吉林大學 2018
[2]新孢子蟲ROP5和ROP16的功能及作用機制[D]. 馬磊.中國農(nóng)業(yè)大學 2017
[3]微小隱孢子蟲微線蛋白互作蛋白的篩選與鑒定研究[D]. 李明英.吉林大學 2016
[4]牛源犬新孢子蟲NcSRS2-NcGRA7復合基因核酸疫苗與重組腺病毒疫苗的研究[D]. 賈立軍.延邊大學 2012

碩士論文
[1]新孢子蟲疫苗對山羊免疫效果的初探[D]. 于立山.延邊大學 2010



本文編號：3063881