煙草是云南省主要經(jīng)濟(jì)作物之一,但是由煙草疫霉菌(Phytophthora nicotianae)侵染引起的黑脛病,嚴(yán)重影響了煙葉的質(zhì)量與產(chǎn)量,阻礙了煙草農(nóng)業(yè)的正常發(fā)展。本文主要研究了云南主要植煙區(qū)的煙草黑脛病菌的表型性狀(生長(zhǎng)速率、產(chǎn)孢量及致病力差異),以及從DNA分子水平上(線粒體基因間隔區(qū))分析菌株間的遺傳多樣性,將其作為一個(gè)指標(biāo),用來(lái)探索云南省煙草黑脛病遺傳分化的情況。1)采集、分離云南省26個(gè)植煙區(qū)的煙草黑脛病菌菌株,并將供試菌株分別接種于OA培養(yǎng)基上,記錄相同培養(yǎng)條件下各菌株在OA培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速率。結(jié)果表明,大部分菌株間的生長(zhǎng)速率差異并不顯著。通過(guò)人工誘導(dǎo)游動(dòng)孢子結(jié)果表明,菌株間的產(chǎn)孢量差異顯著。2)致病性的測(cè)定作為研究煙草黑脛病菌不同地區(qū)菌系的一個(gè)重要的特性。本研究分別采用了室內(nèi)離體南瓜果實(shí)和紅大煙苗創(chuàng)傷接種26個(gè)煙草黑脛病菌菌株,分析各菌株間致病力差異。南瓜片接種法接種結(jié)果表明,26個(gè)菌株均能使得南瓜片發(fā)病,南瓜片由接種部位開(kāi)始向四周腐爛,并且南瓜片上會(huì)布滿一層白色的菌絲。顯著性差異分析(P0.05)各菌株病斑長(zhǎng)度差異,發(fā)現(xiàn)部分的菌株間存在顯著性差異。采用離差平方和系統(tǒng)聚類分析法對(duì)各菌株進(jìn)行聚類分析,可將26個(gè)菌株分為為5大類。觀察聚類結(jié)果發(fā)現(xiàn),有些地理分布較遠(yuǎn)的菌株致病力不相同。煙苗離體莖創(chuàng)傷接種法接種結(jié)果表明,26個(gè)黑脛病菌菌株菌也都能使得煙苗莖桿發(fā)病。病斑從接種處開(kāi)始向周邊擴(kuò)散,隨著接種時(shí)間的加長(zhǎng),病斑從初期的水漬狀暗綠色漸漸轉(zhuǎn)變?yōu)楹诤稚�。觀察發(fā)現(xiàn),部分地區(qū)的菌株間病斑長(zhǎng)度存在顯著性差異現(xiàn)象。聚類分析將26個(gè)菌分為五大類。同南瓜片接種結(jié)果相比較發(fā)現(xiàn),在南瓜上致病能力強(qiáng)的菌株,對(duì)煙苗的致病力并不一定強(qiáng),出現(xiàn)了同一菌株對(duì)不同寄主表現(xiàn)出不同致病力的現(xiàn)象。3)本研究基于線粒體的兩個(gè)基因間隔區(qū)(mt-IGS)分別分析云南省主要植煙區(qū)煙草黑脛病菌遺傳多樣性情況。基于trnY/rns序列片段的遺傳多樣性分析結(jié)果：該基因間區(qū)具有明顯的A/T偏向性。通過(guò)序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)6個(gè)變異位點(diǎn),以堿基的轉(zhuǎn)換為主。核苷酸多樣性(Pi)為0.00101,單倍型多樣性(Hd)為0.353,26個(gè)菌株序列中共檢測(cè)出6種單倍型,其中H5單倍型屬于優(yōu)勢(shì)單倍型,包含21個(gè)菌株存在于該單倍型中,剩余的5種單倍型均屬于獨(dú)享型單倍型。菌株間的核苷酸平均遺傳距離為0.001,各單倍型間的平均遺傳距離為0.004�；趩伪缎偷姆肿影l(fā)育樹(shù)結(jié)果表明,可將獨(dú)享單倍型H4(魯?shù)榭h)單獨(dú)聚為一類,剩余的5種單倍型聚為一類�；趖rnW/cox2序列片段的遺傳多樣性分析結(jié)果：同trnY/rns序列分析結(jié)果相一致,具有明顯的A/T偏向性。26個(gè)菌株間的核苷酸多樣性(Pf)為0.00189,單倍型多樣性(Hd)為0.415。共檢測(cè)出7種單倍型,菌株間的核苷酸平均遺傳距離為0.002,各單倍型間的平均遺傳距離為0.004。H1屬于優(yōu)勢(shì)單倍型,包含20個(gè)菌株存在于該單倍型中,剩余的6個(gè)單倍型均屬于獨(dú)享型單倍型。基于單倍型的分子發(fā)育樹(shù)結(jié)果表明,可將獨(dú)享單倍型H4(紅塔區(qū))單獨(dú)聚為一類,剩下的6種單倍型均聚為一類。通過(guò)基于兩個(gè)線粒體基因間隔區(qū)的分析與致病力差異測(cè)定的結(jié)果表明,云南主要植煙區(qū)的煙草黑脛病菌總體遺傳分化水平較低。結(jié)合表型性狀的研究結(jié)果,并未發(fā)現(xiàn)DNA分子水平上的分析結(jié)果與生長(zhǎng)速率、地理分布、或是致病力的差異間存在明顯的相關(guān)聯(lián)性。同時(shí),未發(fā)現(xiàn)菌株表型性狀間的差異存在明顯的地理分布規(guī)律。
【學(xué)位單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：S435.72

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本文編號(hào)：2813150