【摘要】：新城疫病毒(NDV)、禽白血病病毒(ALV)、禽傳染性支氣管炎病病毒(IBV)、禽傳染性法氏囊病病毒(IBDV)是最常見的四種禽病的致病因子,給家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為初步了解野生鳥類中NDV、ALV、IBV、IBDV的病毒感染狀況,本實(shí)驗(yàn)基于四種病毒基因組的特異性高度保守核酸序列,設(shè)計(jì)了四對通用引物,克隆得到目的片段重組質(zhì)粒,通過正交法優(yōu)化四重RT-PCR反應(yīng)體系,建立了可同時(shí)檢測NDV、ALV、IBV、IBDV的四重RT-PCR檢測方法,并進(jìn)行了特異性和靈敏度檢驗(yàn),最后對67只野生鳥類的四種臟器進(jìn)行了實(shí)際樣本檢測。結(jié)果表明,該方法可以擴(kuò)增得到大小不一的四種目的片段158 bp (NDV)、131 bp (IBV)、 109 bp (ALV)、94 bp (IBDV);特異性實(shí)驗(yàn)表明該方法可以有效檢出四種病毒任意混合樣品,但檢測不出馬利克病毒、禽痘病毒、禽減蛋綜合征病毒和禽流感病毒；靈敏度實(shí)驗(yàn)表明該方法可檢出102 copy的pMD-18T-NDV,102 copy的pMD-18T-ALV,10 copy的pMD-18T-IBV,10 copy的pMD-18T-IBDV。實(shí)際樣本檢測顯示,該方法可以從野生鳥類臟器組織中檢出四種病毒。結(jié)論：優(yōu)化后的四重RT-PCR檢測方法可應(yīng)用于NDV、ALV、IBV、IBDV的臨床診斷和流行病學(xué)研究。
【學(xué)位授予單位】：華中師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

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本文編號：2738019