發(fā)布時(shí)間：2020-02-02 19:39

【摘要】：為了獲得對(duì)水稻稻瘟病菌具有拮抗效應(yīng)的細(xì)菌菌株,我們分別從西藏采集了米拉山口、工布江達(dá)、達(dá)孜縣、比日神山、墨脫縣龍達(dá)村、貢嘎縣以及日喀則等七個(gè)地區(qū)的地表5-10 cm層的土壤,通過土壤梯度稀釋和平板涂布法分離獲得了共計(jì)232株形態(tài)各異的細(xì)菌菌株,通過平板對(duì)峙法分離篩選出了一株對(duì)稻瘟病原菌具有較強(qiáng)抑制作用的細(xì)菌,通過對(duì)該菌株的生理生化測(cè)定和分子測(cè)定確定了其類型,并對(duì)其適宜的碳源、氮源和環(huán)境條件等進(jìn)行了探究,同時(shí)對(duì)其發(fā)酵適宜的環(huán)境因素和營(yíng)養(yǎng)因素進(jìn)行了研究,在此基礎(chǔ)上探索了發(fā)酵液的穩(wěn)定性和拮抗菌及其發(fā)酵液對(duì)病原菌菌絲和孢子的影響。另外,對(duì)發(fā)酵液中有效抑菌物質(zhì)進(jìn)行了簡(jiǎn)單的提取,并完成了對(duì)拮抗菌的抑制機(jī)理的初步探索。主要結(jié)論如下:從西藏地區(qū)的7個(gè)不同地點(diǎn)采集的土樣中共分離出232株形態(tài)有差異的細(xì)菌,通過初篩和平板對(duì)峙法進(jìn)行復(fù)篩,發(fā)現(xiàn)貢嘎縣土樣中有一株具有較強(qiáng)的對(duì)稻瘟病有拮抗作用的細(xì)菌菌株,相對(duì)抑菌效率達(dá)到了90%。通過傳統(tǒng)的生理生化鑒定與16rsDNA分子鑒定相結(jié)合的方法,確定該菌株為枯草芽孢桿菌屬Bacillus atrophaeus。通過檢測(cè)OD600和相對(duì)抑菌效率,確定了該拮抗菌最適生長(zhǎng)碳源和氮源分別為蔗糖和酵母粉,最適生長(zhǎng)溫度為30℃-35℃,生長(zhǎng)最適初始pH為7-8。拮抗菌發(fā)酵條件最適碳源為乳糖,最適氮源為谷氨酸鈉,最適發(fā)酵溫度為30℃-35℃,為節(jié)約能源,可選用30℃,最適發(fā)酵初始pH為8。有機(jī)氮源的利用效率高于無(wú)機(jī)氮源,二糖的利用效率高于單糖和多糖。利用不同方法對(duì)發(fā)酵液中抑菌物質(zhì)進(jìn)行粗提取,發(fā)現(xiàn)有效抑菌物質(zhì)類型并不單一,可能包括大分子蛋白,低分子肽類等,并且具有較強(qiáng)的極性。通過對(duì)發(fā)酵液穩(wěn)定性檢測(cè),發(fā)現(xiàn)抑菌物質(zhì)對(duì)酸堿環(huán)境,紫外輻照不敏感。在40-80℃范圍內(nèi),對(duì)溫度敏感性不高,抑菌效率無(wú)顯著變化,當(dāng)溫度高于100℃時(shí),相對(duì)抑菌效率顯著降低。較好的穩(wěn)定性決定了該拮抗菌具有開發(fā)為生物農(nóng)藥的潛力。拮抗菌發(fā)酵液對(duì)稻瘟病菌絲的生長(zhǎng)和孢子的萌發(fā)具有抑制作用。抑菌物質(zhì)對(duì)病原菌細(xì)胞膜造成破壞,增大細(xì)胞膜通透性,導(dǎo)致胞內(nèi)電解質(zhì)、蛋白質(zhì)以及糖外泄,阻礙了菌絲的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng),抑制了病原菌的發(fā)育。經(jīng)處理的菌絲發(fā)生扭曲變形,原生質(zhì)凝結(jié),膨大斷裂。經(jīng)處理的孢子一方面被延遲了萌發(fā)時(shí)間,一方面極大的縮短了芽長(zhǎng)長(zhǎng)度。最終導(dǎo)致了病原菌生長(zhǎng)受到抑制。拮抗菌一方面通過菌體與病原菌發(fā)生營(yíng)養(yǎng)和空間位點(diǎn)上的競(jìng)爭(zhēng),一方面在發(fā)酵過程中分泌抑菌物質(zhì),綜合作用抑制病原菌生長(zhǎng)。但具體抑菌物質(zhì)的種類以及生防制劑制備方式仍需要進(jìn)一步的探索和研究。
【學(xué)位授予單位】：西南科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S435.111.41;S476.1

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