發(fā)布時(shí)間：2020-01-26 00:09

【摘要】：龍眼(Dilocarpus longan Lour.)是我國(guó)亞熱帶地區(qū)名貴特色果樹(shù),其果實(shí)富含類黃酮、多酚和類胡蘿卜素等多種營(yíng)養(yǎng)成分,是一種藥食兩用作物。龍眼胚性培養(yǎng)物具有生長(zhǎng)速度快,增殖系數(shù)大,再生能力強(qiáng)等諸多優(yōu)點(diǎn),可應(yīng)用于龍眼次生代謝物生產(chǎn)。此外,研究表明植物次生代謝物的積累往往受逆境脅迫的影響。本研究以龍眼胚性培養(yǎng)物為研究對(duì)象,研究溫度與SA對(duì)類黃酮和類胡蘿卜素積累的影響,同時(shí)研究在培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞保護(hù)酶活性、類黃酮和類胡蘿卜素相關(guān)合成基因表達(dá)的變化。希望本研究能為離體生產(chǎn)龍眼類黃酮和類胡蘿卜素等次生代謝物質(zhì)提供理論指導(dǎo)。主要結(jié)果如下:1培養(yǎng)溫度和SA濃度對(duì)龍眼胚性愈傷組織中類黃酮和類胡蘿卜素積累的影響以龍眼'紅核子'胚性愈傷組織為試驗(yàn)材料,分別研究培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度與SA濃度對(duì)龍眼胚性愈傷組織中類黃酮和類胡蘿卜素積累的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明:培養(yǎng)時(shí)間為30 d時(shí)龍眼胚性愈傷組織中類黃酮和類胡蘿卜素積累量最高;恒溫30/30 ℃培養(yǎng)下龍眼胚性愈傷組織中類黃酮與類胡蘿卜素積累量最高,變溫35/20 ℃培養(yǎng)下龍眼胚性愈傷組織中類黃酮積累量最高,變溫30/20 ℃培養(yǎng)下龍眼胚性愈傷組織中類胡蘿卜素積累量最高;培養(yǎng)基中SA濃度為0.50、1.00、1.50和2.00 mg · L-1時(shí)龍眼胚性愈傷組織中類黃酮積累量最高,SA濃度為2.50mg · L-1時(shí)龍眼胚性愈傷組織中類胡蘿卜素積累量最高。2培養(yǎng)溫度與SA添加時(shí)間對(duì)龍眼胚性懸浮細(xì)胞中類黃酮和類胡蘿卜素積累的影響以龍眼'紅核子'胚性懸浮細(xì)胞為試驗(yàn)材料,以溫度和SA對(duì)龍眼胚性愈傷組織中類黃酮和類胡蘿卜素積累的研究結(jié)果為基礎(chǔ),研究SA添加時(shí)間對(duì)龍眼胚性懸浮細(xì)胞中類黃酮和類胡蘿卜素積累的影響以及溫度與SA配伍作用對(duì)龍眼懸浮細(xì)胞中類黃酮與類胡蘿卜素積累的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明:在第2 d向培養(yǎng)基中加入2.00 mg·L-1的SA時(shí)龍眼胚性懸浮細(xì)胞中類黃酮和類胡蘿卜素積累量最高;在恒溫30/30 ℃培養(yǎng)的第2 d加入培養(yǎng)基中添加2.00 mg · L-1的SA時(shí),龍眼胚性懸浮細(xì)胞中類黃酮與類胡蘿卜素積累量分別極顯著高于恒溫30/30 ℃和 25/25 ℃培養(yǎng)下。3培養(yǎng)時(shí)間與溫度及SA濃度對(duì)龍眼胚性愈傷組織增殖的影響以龍眼'紅核子'胚性愈傷組織為試驗(yàn)材料,分別研究培養(yǎng)時(shí)間、溫度和SA濃度對(duì)龍眼胚性愈傷組織增殖的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明:培養(yǎng)時(shí)間為50 d時(shí),龍眼胚性愈傷組織增殖系數(shù)最大;恒溫35/35 ℃培養(yǎng)下龍眼胚性愈傷組織的增殖系數(shù)最大,變溫35/20 ℃培養(yǎng)下龍眼胚性愈傷組織的增殖系數(shù)最大;培養(yǎng)基中SA濃度為2.00 mg · L-1和1.50 mg · L-1時(shí)龍眼胚性愈傷組織的增殖系數(shù)最大。4溫度與SA對(duì)龍眼胚性愈傷組織中細(xì)胞保護(hù)酶活性的影響以龍眼'紅核子'胚性愈傷組織為試驗(yàn)材料,研究不同溫度和SA濃度培養(yǎng)第30 d時(shí)龍眼胚性愈傷組織中SOD、CAT、POD細(xì)胞保護(hù)酶活性的變化。試驗(yàn)結(jié)果表明:恒溫培養(yǎng)下,龍眼胚性愈傷組織中SOD 酶的活性為 25/25 ℃20/20 ℃30/30 ℃35/35 ℃,POD 酶的活性為 25/25 ℃20/20 ℃30/30 ℃35/35 ℃,CAT 酶的活性為20/20 ℃25/25 ℃30/30 ℃35/35 ℃;變溫條件下 SOD、POD、CAT 酶活性均為 20/20 ℃25/25 ℃30/20 ℃35/20 ℃;隨著培養(yǎng)基中SA濃度的升高,龍眼胚性愈傷組織中SOD、POD、CAT酶的活性均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì),培養(yǎng)基中SA濃度為1.50 mg · L-1時(shí)龍眼胚性愈傷組織中SOD酶的活性最高,培養(yǎng)基中SA濃度為1.00 mg·L-1時(shí)POD酶的活性最高,培養(yǎng)基中SA濃度為1.00和1.50 mg·L-1時(shí)CAT酶的活性最高。5溫度與SA對(duì)龍眼胚性愈傷組織中類黃酮和類胡蘿卜素合成相關(guān)基因表達(dá)的影響及相關(guān)性分析以龍眼'紅核子'胚性愈傷組織為試驗(yàn)材料,研究不同溫度和SA濃度培養(yǎng)第30 d時(shí)龍眼胚性愈傷組織中類黃酮和類胡蘿卜素合成相關(guān)基因表達(dá)的影響及最優(yōu)溫度和最優(yōu)SA濃度培養(yǎng)下不同生長(zhǎng)階段的龍眼胚性愈傷組織中類黃酮和類胡蘿卜素合成相關(guān)基因表達(dá)相關(guān)性。試驗(yàn)結(jié)果表明:在不同溫度與SA濃度培養(yǎng)第30 d的龍眼胚性愈傷組織中,CHS表達(dá)量、DFR表達(dá)量均與類黃酮含量變化呈正相關(guān)關(guān)系,GGPS表達(dá)量、PSY表達(dá)量均與類胡蘿卜素含量變化呈正相關(guān)關(guān)系。在最優(yōu)培養(yǎng)溫度(30/30 ℃)下的龍眼胚性愈傷組織在生長(zhǎng)第25、30d時(shí)CHS表達(dá)量、CHI表達(dá)量、F3H表達(dá)量、DFR表達(dá)量呈兩兩正相關(guān)正相關(guān)關(guān)系;在最優(yōu)培養(yǎng)溫度(30/30 ℃)下龍眼胚性愈傷組織中的GGPS表達(dá)量、PSY表達(dá)量、PDS表達(dá)量、ZDS表達(dá)量始終呈兩兩正相關(guān)關(guān)系;在最優(yōu)SA濃度(1.50 mg·L-1的SA)培養(yǎng)下龍眼胚性愈傷組織中CHS表達(dá)量與CHI表達(dá)量、F3H表達(dá)量與DFR、GGPS表達(dá)量與PSY表達(dá)量、PDS表達(dá)量與ZDS表達(dá)量始終呈兩兩正相關(guān)關(guān)系。6溫度與SA對(duì)龍眼胚性懸浮細(xì)胞中類黃酮和類胡蘿卜素合成相關(guān)基因表達(dá)的影響及相關(guān)性分析以龍眼'紅核子'胚性懸浮細(xì)胞為試驗(yàn)材料,研究SA與溫度對(duì)不同生長(zhǎng)階段的龍眼胚性懸浮細(xì)胞中類黃酮和類胡蘿卜素合成相關(guān)基因表達(dá)的影響及相關(guān)性分析。試驗(yàn)結(jié)果表明:在溫度與SA的作用下,生長(zhǎng)10 d的龍眼胚性懸浮細(xì)胞中類黃酮積累量與CHI、CHS、F3H、DFR基因的穩(wěn)定性高表達(dá)有關(guān);在溫度與SA的作用下,龍眼胚性懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)的8、10 d時(shí)CHI表達(dá)量分別與CHS表達(dá)量、F3H表達(dá)量、DFR表達(dá)量呈兩兩負(fù)相關(guān)關(guān)系。在溫度與SA的作用下,生長(zhǎng)10 d的龍眼胚性懸浮細(xì)胞中類胡蘿卜素含量的顯著升高與GGPS、PSY、PDS、ZDS基因在胚性懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)2、4d時(shí)的高表達(dá)有關(guān);在溫度與SA的作用下,龍眼胚性懸浮細(xì)胞在生長(zhǎng)的第2、4、6 d時(shí)PSY表達(dá)量、PDS表達(dá)量、ZDS表達(dá)量呈兩兩正相關(guān)關(guān)系;在溫度與SA的作用下,龍眼胚性懸浮細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程中GGPS表達(dá)量與PSY表達(dá)量在始終呈現(xiàn)高度的正相關(guān)關(guān)系。深入開(kāi)展龍眼胚性培養(yǎng)物中類黃酮與類胡蘿卜素物質(zhì)積累的研究,可以更加規(guī)范的開(kāi)展龍眼類黃酮與類胡蘿卜素的生產(chǎn)工作,可以建立科學(xué)、高效的工廠化生產(chǎn)流程,提高企業(yè)生產(chǎn)效率和企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力。對(duì)于充分挖掘中醫(yī)藥資源、推動(dòng)中醫(yī)藥的現(xiàn)代化和國(guó)際化具有重要意義。龍眼基因組數(shù)據(jù)庫(kù)公布對(duì)于深入開(kāi)展龍眼中類黃酮與類胡蘿卜素的研究提供了新的平臺(tái)與機(jī)遇。
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S667.2

【參考文獻(xiàn)】

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7 柯q，

本文編號(hào)：2573156