【摘要】：柑橘是世界上重要的水果之一。但柑橘存在童期長的問題,嚴(yán)重影響了傳統(tǒng)育種方法的效率。近年來不斷發(fā)展的轉(zhuǎn)基因技術(shù)為柑橘研究提供了更快速的方法,而采用短童期材料可加速研究進(jìn)程。本實(shí)驗(yàn)以短童期材料-早花檸檬的試管實(shí)生苗上胚軸為外植體,采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)化,最終得到了8株轉(zhuǎn)基因再生植株。同時對影響早花檸檬轉(zhuǎn)化效率的因素進(jìn)行了探討。主要結(jié)果如下:1.轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白基因早花檸檬植株再生。共進(jìn)行了7批材料的轉(zhuǎn)化,總計2215個莖段,平均再生芽率60.6%,最高達(dá)75%。經(jīng)體式熒光顯微鏡檢測,表明再生芽平均陽性率1.8%,最高達(dá)2.8%。最終8個陽性芽生根并移栽至溫室;再生植株莖段和葉片熒光明顯,經(jīng)PCR檢測為陽性,表明再生植株均為陽性植株。2.影響轉(zhuǎn)化效率的因素研究。分別設(shè)置3個乙酰丁香酮和農(nóng)桿菌濃度,發(fā)現(xiàn)乙酰丁香酮濃度變化對轉(zhuǎn)化率影響不大;轉(zhuǎn)化率隨著農(nóng)桿菌濃度增加而降低,農(nóng)桿菌濃度OD600在0.6最適宜。轉(zhuǎn)化過程中發(fā)現(xiàn),該基因型暗培一周的上胚軸切口可形成愈傷組織;一般一個切口再生一個不定芽,極少再生多個不定芽,只有極少的兩端均再生不定芽;該上胚軸共培后易黃化,切口處再生愈傷能力較弱,部分上胚軸易褐化、不易再生不定芽,即使使用生長狀態(tài)良好的實(shí)生苗依然出現(xiàn)上述情況。
【圖文】：

華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017 屆碩士研究生學(xué)位論文3.4 轉(zhuǎn)化后的熒光檢測轉(zhuǎn)化后約 40 d 熒光效果最佳，體式熒光顯微鏡下檢測再生不定芽熒光，480 nm波長激發(fā)光下觀察發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因陽性芽綠色熒光明顯，未轉(zhuǎn)基因芽則表現(xiàn)紅色熒光。本實(shí)驗(yàn)所用材料極少出現(xiàn)一個切口長出多個不定芽的現(xiàn)象，剔除非陽性芽有利于陽性芽的生長。再生陽性芽中嵌合體較多，嵌合體也是上胚軸作為外植體普遍存在的情況，，很難避免。A CB

圖 3-3 再生植株熒光檢測 不同再生植株葉片熒光；E： 再生植株莖段熒光；F： 非轉(zhuǎn)基因植株莖段熒光；轉(zhuǎn)基因植株葉片熒光Fig.3-3 Fluorescence detection of regeneration plants-D: Fluorescence of regenerated plant leaves; E: Fluorescence of regenerated plant stemFluorescence of non-transgenic plant stem; G: Fluorescence of non-transgenic plant lea再生植株的 PCR 鑒定M 1 2 3 4 5 6 7 8 P CD E F
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S666.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2572190