發(fā)布時間：2019-11-02 02:01

【摘要】：啟動子在轉(zhuǎn)錄水平上發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。據(jù)近年來科研工作者的研究,發(fā)現(xiàn)了植物中啟動子的結(jié)構(gòu)特點及其功能,并闡述了植物啟動子在未來的各項研究中的方向。水稻是人類重要的糧食作物,近些年人們通過研究很多方法培育新型水稻品種,其中水稻特異性啟動子方面的研究成為近來的較熱門領(lǐng)域。利用組織器官特異型啟動子,對其特定性狀進(jìn)行改良,具有重要意義。本課題研究的主要目的是,從水稻中分離出維管束鞘特異表達(dá)的啟動子,為培育新型水稻品種提供技術(shù)以及方法支持。具體研究內(nèi)容主要有以下幾點:1、對水稻增強子捕捉系進(jìn)行篩選,通過GUS染色篩選出維管束鞘特異表達(dá)的株系。具體方法通過徒手切片觀察水稻葉片橫切面的顯微結(jié)構(gòu),篩選出21個染色較明顯的株系。2、將徒手切片得到的21個株系,取葉片做石蠟切片分析,進(jìn)一步確定上述株系的水稻維管束鞘中有GUS基因特異的表達(dá),獲得5株GUS基因特異表達(dá)明顯的株系可用于后續(xù)試驗。3、根據(jù)含有GUS基因的載體序列,設(shè)計引物,再通過TAIL-PCR的方法,克隆載體上游序列,對所得到的序列在NCBI內(nèi)與野生型的日本晴水稻進(jìn)行比對,定位插入位點。4、PCR方法克隆上游序列,構(gòu)建植物表達(dá)載體。5、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化擬南芥,收集T0代種子,重新鋪板、移栽,檢測所克隆的啟動子啟動了GUS基因的表達(dá)。
【圖文】：

河北科技大學(xué)碩士學(xué)位論文（9）由于本實驗材料前期經(jīng)過 GUS 染色處理過了，所以不再需要染色；（10）顯微鏡下進(jìn)行觀察。2.4 結(jié)果與分析2.4.1 GUS 染色法突變體初篩從 3 萬份增強子捕捉系內(nèi)共篩選出 260 份著色的株系，，在 260 份內(nèi)共分為 4 類，分別為全部著色，葉肉細(xì)胞著色，維管束著色，以及著色區(qū)域較模糊的株系。其中重點看維管束著色色的的株系，共有 71 個。GUS 染色見圖 2-1。

注： 圖 a 未著色葉片；圖 b 葉肉細(xì)胞著色；圖 c 維管束著色；d 圖為全部著色。圖 2-2 徒手切片 GUS 染色初篩結(jié)果71 個株系 GUS 染色初篩維管束著色編號見表 2-5。表 2-5 GUS 染色初篩維管束著色編號編號 GUS 染色 編號 GUS 染色 編號 GUS 染色5-8-62 著色 6-3-44 著色 7—7-17 著色5-9-80 著色 6-2-61 著色 7-4-50 著色5—9-21 著色 6-5-47 著色 6-5-70 著色6-1-52 著色 7-6-95 著色 6—7-20 著色5—7-30 著色 7-3-41 著色 B5-6-51 著色5-7-73 著色 6—5-5 著色 B5-8-88 著色5-7-78 著色 6-6-51 著色 B5-3-31 著色5-7-87 著色 9-2-28-6-1 著色 B6-2-80 著色5-8-87 著色 6—6-11 著色 B5-7-56 著色
【學(xué)位授予單位】：河北科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S511

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2554251