【摘要】：枸杞(Lycium barbarum L.)是西北地區(qū)獨(dú)特的沙生藥用植物,國(guó)內(nèi)外對(duì)枸杞的研究多集中在對(duì)其化學(xué)成分、抗逆性、抗氧化性及其相關(guān)功能產(chǎn)品的研究上,而對(duì)其內(nèi)生真菌研究較少。本研究以寧夏枸杞為研究對(duì)象,在摸清其內(nèi)生真菌多樣性及分布基礎(chǔ)上,以植物病原真菌為靶標(biāo)菌,篩選高活性拮抗菌株,探究其抑菌、抗生和重寄生等生防潛力;篩選產(chǎn)幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶的菌株探究其產(chǎn)酶條件;通過(guò)內(nèi)生真菌對(duì)宿主的侵染定殖,測(cè)定內(nèi)生真菌對(duì)枸杞植株生長(zhǎng)、抗病和防御酶活性的影響,初步揭示其抗病作用機(jī)制。研究結(jié)果如下:1、采用組織分離法對(duì)健康枸杞植株進(jìn)行內(nèi)生真菌分離,利用形態(tài)特征和rDNA-ITS序列分析對(duì)菌株進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明:7個(gè)寧夏枸杞品種21份樣品中共分離得到內(nèi)生真菌363株,這些菌株分屬14個(gè)屬,其中鏈格孢屬(Alternaria)、梭孢殼屬(Thielavia)和曲霉屬(Aspergillus)為優(yōu)勢(shì)屬,分別占分離菌株數(shù)的46%、14%和13%。枸杞植株各器官都有內(nèi)生真菌分布,莖部?jī)?nèi)生真菌多樣性指數(shù)最大,為0.88,且果與莖部的相似性系數(shù)最大。內(nèi)生真菌的分離率和分布頻率說(shuō)明不同枸杞品種間內(nèi)生真菌分布存在差異。2、以枸杞炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)和4種常見(jiàn)植物病原真菌為靶標(biāo)菌,采用皿內(nèi)對(duì)峙和孢子萌發(fā)抑制試驗(yàn),測(cè)試了 121株枸杞內(nèi)生真菌的拮抗作用。結(jié)果表明,菌株NQ3GF1、NQ7GF3和NQ8YF3具有高拮抗活性,其中NQ7GF3的拮抗活性最高,抑菌帶寬度達(dá)9.96mm;菌株NQ3GFi與NQ4YF11具有一定廣譜抗菌活性;菌株NQ3GF1和NQ7GF3無(wú)菌絲發(fā)酵液在濃度大于25%時(shí),對(duì)枸杞炭疽病菌孢子萌發(fā)有較好的抑制效果,6 h后的抑制率均在75%以上;顯微觀察結(jié)果表明,菌株NQ3GF1與枸杞炭疽病菌有纏繞、穿透等重寄生現(xiàn)象;并能成功定殖于枸杞根部。經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定,菌株NQ3GF1、NQ7GF3和NQ8YF3分別為細(xì)極鏈格孢(Alternaria tenuissima)、夏孢枝孢菌(Cladosporium uredinicola)和蓋姆斯炭角菌(Coniolariella gamsii)。3、采用透明圈法,對(duì)6株高活性枸杞拮抗內(nèi)生真菌菌株進(jìn)行了產(chǎn)胞外幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶篩選,獲得2株同時(shí)產(chǎn)幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶的菌株,其中菌株NQ3GF1產(chǎn)酶活性最高,透明圈半徑達(dá)6 mm以上。用牛津杯法測(cè)定NQ3GF1粗酶液的抑菌效果,發(fā)現(xiàn)2種粗酶液對(duì)枸杞炭疽病菌(C.gloeosporioides Pena.)的抑菌帶寬度均大于10 mm;對(duì)菌株NQ3GF1產(chǎn)酶條件的研究結(jié)果表明,當(dāng)碳源(茯苓粉或膠體幾丁質(zhì))為0.6%,氮源為蛋白胨,初始pH值在6～8之間,25℃振蕩培養(yǎng)6 d時(shí),培養(yǎng)液中幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶活性較高。4、利用顯微觀察和回接試驗(yàn)研究了枸杞內(nèi)生真菌NQ3GF1在枸杞根莖部的侵染定殖情況及對(duì)宿主生長(zhǎng)和防御酶活性的影響。結(jié)果表明,在枸杞接種24～48 h時(shí)菌絲在根表形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),72 h后菌絲能穿透表皮侵入至根髓部;濃度低于30%的滅活菌絲發(fā)酵液和濃度低于50%的活菌發(fā)酵液對(duì)枸杞組培苗、盆栽苗生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用,當(dāng)濃度高于此濃度時(shí),滅活菌絲及活菌發(fā)酵液均抑制植物的生長(zhǎng);內(nèi)生真菌NQ3GF1在宿主體內(nèi)定殖后,提高了枸杞苗的抗病性,對(duì)枸杞炭疽病防效達(dá)到75.27%,是對(duì)照組枸杞苗的3倍;菌株NQ3GF1發(fā)酵液在接種后3～12 d,各濃度處理組PAL酶活性較對(duì)照組活性增高,分別在第9 d和第6 d達(dá)到最高,為22.41和5.61 U/g FW,POD、PPO和SOD各酶活性均低于對(duì)照組。
文內(nèi)圖片：
圖片說(shuō)明： 屬（Ｃ丨ａｄｏｓｐｏｆｉｕｍ）、鑣：刀菌屬（Ｆｕｓａｒｈｉｍ）、青霉菌屬（Ｐｅｎｋ：丨Ｈｉｗｎ）、光黑殼屬ＣＰｒｅｕｓｓｉＷ、裂逡逑殼菌屬（ＳｃｈｉｚｃＵｈｅｃｈｔｍ）、糞殼菌屬（ＳｏｒｄａＨｏｍｙｃｅｔｅｓ）、戴氏霉屬（Ｔａ／ｆａｎｇ！ａｎｉａ）、梭抱殼屬逡逑（７７？／Ｗａｖ／ａ）、火絲菌屬（７＞／ｃｔｏ／７＞７ｆｌ０和炭角菌屬（辦／ｏｒ／Ｗ）邋１４個(gè)屬（圖２－１）。其中鏈格孢屬逡逑（ｄ／ＺｅＡｍｂ）、梭孢殼屬（７７？／ｅ／ｍ，／ａ）和曲霉屬（／＾ｐｅ／ｒｇ／Ｚｗ）為優(yōu)勢(shì)屬，分別占分離菌數(shù)的４６％、逡逑１４％和１３％；毛殼屬（Ｃ／＾＿７／灥）為常見(jiàn)屬，占分離菌數(shù)的１０％以上；其它各屬都為稀有屬，逡逑所占分離菌數(shù)的比例不足５％。逡逑１％邐１％邐１％邐資雙極霉屬（ｍｐｏｈｒｉｓ）逡逑＼％邐孩炭角菌屬邋Ｏｓｏｒｉｏ）逡逑魏火絲菌屬（ＴｒｉｄｍｉｒｉｎＱ〉逡逑１／０邋＾／／邋／＾邐餐e壝咕停校澹睿耄椋歟歟椋酰恚╁義希矗ュ螢擔(dān)ǎ櫻洌觶歟錚簦瑁澹悖耄椋恚╁義縣蕹渚灣澹ǎ櫻錚潁洌錚潁椋錚恚悖澹簦澹螅╁義希矗叮，

本文編號(hào)：2514140