【摘要】：本文以紅螯光殼螯蝦(Cherax quadricarinatus)為研究對(duì)象,運(yùn)用生物化學(xué)、免疫毒理學(xué)以及分子生物學(xué)等相關(guān)學(xué)科的研究方法及生物技術(shù),通過控制外部的環(huán)境溫度條件,初步探討了溫度變化尤其是低溫對(duì)紅螯光殼螯蝦生長(zhǎng)及免疫的影響,具體研究結(jié)果如下:1.不同溫度對(duì)紅螯光殼螯蝦生長(zhǎng)性能及抗氧化指標(biāo)的影響為探究溫度對(duì)紅螯光殼螯蝦生長(zhǎng)性能、抗氧化指標(biāo)、免疫力及抗病力的影響,進(jìn)行了 8周的養(yǎng)殖試驗(yàn),試驗(yàn)設(shè)置了四個(gè)溫度組,分別為10℃、16℃、22℃、28℃,每組3個(gè)重復(fù)。結(jié)果表明,不同溫度的紅螯光殼螯蝦存活率和增長(zhǎng)率存在顯著差異,低溫條件(10℃)下會(huì)顯著抑制紅螯光殼螯蝦的攝食、生長(zhǎng)和存活,而適宜的溫度,則對(duì)紅螯光殼螯蝦的存活和生長(zhǎng)有顯著促進(jìn)作用。研究溫度對(duì)紅螯光殼螯蝦肝胰腺、胃、鰓三種組織消化酶和抗氧化酶活性的影響時(shí),發(fā)現(xiàn)28℃組紅螯光殼螯蝦的淀粉酶和胰蛋白酶活性最高,顯著高于其余組,而10℃組的淀粉酶和胰蛋白酶活性最低,顯著低于其余組。三種組織SOD酶活性在28℃時(shí)達(dá)到峰值,10℃時(shí)SOD酶活性最低。結(jié)果表明,低溫能夠顯著抑制紅螯光殼螯蝦消化酶和抗氧化酶的活性,從而影響其生長(zhǎng)和存活。2.不同溫度對(duì)紅螯光殼螯蝦免疫指標(biāo)的影響研究溫度對(duì)紅螯光殼螯蝦肝胰腺、鰓、肌肉三種組織ACP、AKP、LSZ活性影響時(shí),發(fā)現(xiàn)22℃組的ACP和AKP活性最高,10℃組ACP和AKP活性最低且顯著低于其它組(P0.05)。溶菌酶活性在10℃組最低,22℃組的溶菌酶活性和28℃沒有顯著差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,低溫會(huì)顯著抑制紅螯光殼螯蝦的免疫酶活性,從而對(duì)其免疫系統(tǒng)造成損害,而適宜的溫度,則能增強(qiáng)紅螯光殼螯蝦的免疫力。3.不同溫度對(duì)紅螯光殼螯蝦抗病力的影響試驗(yàn)蝦紅螯光殼螯蝦經(jīng)注射0.1m1,1.0× 108cfu/ml濃度的嗜水氣單胞桿菌,不同溫度組SOD酶活力有顯著差異。結(jié)果表明,低溫條件(10℃)時(shí),嗜水氣單胞桿菌感染能力很弱,SOD酶活力較強(qiáng),但隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng),也會(huì)降低SOD酶活力,表明感染程度與溫度和時(shí)間都有關(guān),雖然低溫條件下,嗜水氣單胞桿菌的感染能力比較弱,但若長(zhǎng)時(shí)間處于低溫條件中,也會(huì)顯著影響免疫酶的活性。而隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng),22℃組和28℃組SOD活力卻逐漸增強(qiáng)恢復(fù)到原水平,表明適宜的溫度能顯著增強(qiáng)紅螯光殼螯蝦的抗病力。4.紅螯光殼螯蝦α-淀粉酶基因的克隆和表達(dá)分析運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù),克隆了紅螯光殼螯蝦α-淀粉酶基因的片段,該片段長(zhǎng)970bp,開放閱讀框長(zhǎng)528bp,編碼175個(gè)氨基酸殘基,對(duì)α-淀粉酶做基因同源性比對(duì),結(jié)果表明,序列與克氏原螯蝦和凡納濱對(duì)蝦的同源性最高,分別為89%和85%,對(duì)其生物起源進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)與克氏原螯蝦親緣關(guān)系最近。熒光定量PCR結(jié)果顯示,不同溫度組的紅螯光殼螯蝦α-淀粉酶基因表達(dá)量存在顯著差異,28℃組表達(dá)量最高,10℃組最低,顯著低于其余組,表明α-淀粉酶基因參與了紅螯光殼螯蝦生長(zhǎng)過程,對(duì)紅螯光殼螯蝦的生長(zhǎng)有顯著的促進(jìn)作用。5.紅螯光殼螯蝦HSP70和Mn-SOD基因的表達(dá)分析運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),RT-PCR結(jié)果顯示,不同溫度對(duì)兩條基因的表達(dá)都有顯著的影響。HSP70基因在10℃和28℃時(shí)都有高表達(dá),Mn-SOD基因在10℃組時(shí)表達(dá)量最低。表明,高溫和低溫環(huán)境都會(huì)提高HSP70基因的表達(dá),從而誘導(dǎo)合成HSP70蛋白,而Mn-SOD基因在適宜溫度時(shí)才會(huì)誘導(dǎo)其表達(dá)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S917.4

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本文編號(hào)：2458147