【摘要】:微型浮游生物在海洋中分布廣泛并且具有相當(dāng)高的數(shù)量,它們?cè)诤Q笊鷳B(tài)系統(tǒng)中占據(jù)著非常重要的位置,在系統(tǒng)內(nèi)能量傳遞與轉(zhuǎn)化和物質(zhì)循環(huán)等過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,在環(huán)境生態(tài)研究領(lǐng)域備受關(guān)注。隨著全球氣溫逐漸升高和海洋環(huán)境污染形勢(shì)的惡化,近幾十年來(lái)世界各國(guó)都致力于與海洋固碳、污染防治等相關(guān)的微生物研究,好氧不產(chǎn)氧光合異養(yǎng)細(xì)菌(AAPB)是一類最典型研究對(duì)象之一。它們是自然界重要的一類特殊的光合異養(yǎng)微生物,廣泛分布在各種海洋環(huán)境中,在微生物生態(tài)學(xué)、海洋碳匯和海洋生態(tài)系統(tǒng)的生物地球化學(xué)循環(huán)的過(guò)程中具有潛在的重要作用。本研究主要應(yīng)用TA克隆技術(shù)和高通量測(cè)序等分子生物學(xué)方法對(duì)我國(guó)東極青浜島貽貝養(yǎng)殖區(qū)海域和非養(yǎng)殖區(qū)AAPB的多樣性情況、群落分布及其影響因子進(jìn)行探討。我們于2015年10月-2016年7月分四個(gè)季度依次在研究海域采集0.5m深度的表層海水樣品,采樣的同時(shí)進(jìn)行水溫、鹽度等水質(zhì)參數(shù)的檢測(cè)。對(duì)采集的水樣進(jìn)行抽濾過(guò)膜處理,然后提取浮游微生物總基因組DNA,利用編碼光反應(yīng)中心的小亞基pufM基因的特定引物進(jìn)行擴(kuò)增,通過(guò)構(gòu)建TA克隆文庫(kù)進(jìn)行驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn),然后運(yùn)用高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)行測(cè)序,進(jìn)而對(duì)AAPB多樣性和群落結(jié)構(gòu)的分析。通過(guò)對(duì)海水樣品進(jìn)行高通量測(cè)序,總計(jì)得到個(gè)755,040條優(yōu)質(zhì)序列,包括18,673個(gè)OTU,分屬于161個(gè)屬。根據(jù)計(jì)算得到各樣品的Chao指數(shù)的結(jié)果,我們推斷出各樣品豐度排列順序是:DD1DC1DX1DQ2DQ1DD2DC2DX2,根據(jù)Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)結(jié)果可知各站點(diǎn)微生物多樣性排序結(jié)果是:DD1DQ2DC1DQ1DD2DC2DX1DX2。樣品的覆蓋度(Coverage)的值超過(guò)了0.9,說(shuō)明覆蓋度和測(cè)序深度已經(jīng)足夠,構(gòu)建的文庫(kù)可用于評(píng)估AAPB多樣性情況。在青浜島貽貝養(yǎng)殖區(qū)和非養(yǎng)殖區(qū)海域,四個(gè)季度的海水樣品分析結(jié)果中的細(xì)菌類群主要包括Actinobacteria(放線菌門(mén))、Bacteroidetes(擬桿菌門(mén))、Cyanobacteria(藍(lán)藻門(mén))、Deinococcus-Thermus(異常球菌-棲熱菌門(mén))、Euryarchaeota(廣古菌門(mén))、Firmicutes(厚壁菌門(mén))、Fusobacteria(梭桿菌門(mén))、Proteobacteria(變形菌門(mén))和unclassified未分類細(xì)菌。在這個(gè)8個(gè)樣品中共有的微生物是變形菌門(mén)和厚壁菌門(mén),其中變形菌門(mén)為最優(yōu)勢(shì)菌群,厚壁菌門(mén)排在第二位。Proteobacteria(變形菌門(mén))的Alphaproteobacteria(α變形菌綱)中的Methylobacterium屬、Sphingomonas屬、Rhodobacter屬和Brevundimonas屬等菌屬在所有的樣品中豐度都較高,說(shuō)明了這些細(xì)菌適宜生存的空間和時(shí)間范圍都比較廣,因此也說(shuō)明了變形菌對(duì)環(huán)境超強(qiáng)的適應(yīng)能力和分布的范圍非常地廣。由樣品聚類樹(shù)狀圖的分析結(jié)果,縱觀時(shí)間和空間尺度,秋季的養(yǎng)殖區(qū)和冬季非養(yǎng)殖區(qū)群落結(jié)構(gòu)最為近似。根據(jù)PCA分析結(jié)果可知,非養(yǎng)殖區(qū)春、夏、秋和冬季四個(gè)樣品距離較近,而來(lái)自養(yǎng)殖區(qū)的夏、秋和春季三個(gè)樣品距離較近,則說(shuō)明這些樣品的組成較相似。養(yǎng)殖區(qū)冬季的樣品和其他幾個(gè)樣品距離均比較遠(yuǎn),說(shuō)明這個(gè)樣品具有獨(dú)特的群落組成,同一個(gè)季節(jié)兩個(gè)海域樣品距離比較近的是春季、夏季和冬季,說(shuō)明在春季、夏季和冬季,兩個(gè)海域的微生物群落結(jié)構(gòu)比較相似。RDA分析是一種可以檢測(cè)環(huán)境參數(shù)、樣品、微生物三者之間的關(guān)系或者兩兩之間的關(guān)系的線性模型。RDA分析結(jié)果顯示,DO(溶解氧)、Salinity(鹽度)、DIN(溶解無(wú)機(jī)氮)、SiO32-(硅酸鹽)和T(溫度)是影響AAPB屬分布的非常重要的一些環(huán)境因子。由于PO43-(磷酸鹽)在零點(diǎn)位置,射線很短,所以對(duì)AAPB群落分布無(wú)相關(guān)性影響。這幾種環(huán)境因子中,T(溫度)和Salinity(鹽度)的射線比其他幾個(gè)因子長(zhǎng),說(shuō)明這兩個(gè)因子是影響AAPB的群落分布的最重要的環(huán)境因素。本研究的結(jié)果顯示,青浜島海域蘊(yùn)含著較為豐富的AAPB類群,為全面認(rèn)識(shí)在特殊功能海域中AAPB多樣性和豐度奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:浙江海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號(hào)】:S917.1
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本文編號(hào):
2436980
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