【摘要】：鉀是植物生長(zhǎng)發(fā)育所必需的大量元素之一,參與植物體內(nèi)許多重要的生理功能。馬鈴薯屬喜鉀作物,鉀營(yíng)養(yǎng)能夠提高馬鈴薯的光合效率,還可影響光合產(chǎn)物的合成和運(yùn)輸,影響馬鈴薯的品質(zhì)和產(chǎn)量高低。因此,鉀元素在植物體內(nèi)的積累對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育起著至關(guān)重要的作用。以馬鈴薯組培幼苗反轉(zhuǎn)錄出的cDNA為模板,PCR擴(kuò)增了 SKT1蛋白的胞內(nèi)區(qū)的1758 bp的基因片段。構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET30-SKT1,轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)表達(dá)株菌,用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE檢查發(fā)現(xiàn)SKT1蛋白主要是以包涵體的形式存在。本文利用6 M的鹽酸胍對(duì)SKT1包涵體進(jìn)行溶解,利用Ni柱親和純化,在復(fù)性緩沖液中復(fù)性。目的蛋白SKT1復(fù)性得率大于40%,純化后純度達(dá)到95%以上,Western Blotting鑒定結(jié)果正確。本論文克隆了馬鈴薯費(fèi)烏瑞它鉀離子通道蛋白SKT1基因片段,原核表達(dá)并純化SKT1蛋白,為下一步研究蛋白SKT1的晶體結(jié)構(gòu)與功能,以及與相關(guān)蛋白的相互作用奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Potassium is one of the essential elements for plant growth and development, and participates in many important physiological functions in plants. Potassium nutrition can improve the photosynthetic efficiency of potato, affect the synthesis and transportation of photosynthetic products, and affect the quality and yield of potato. Therefore, the accumulation of potassium in plants plays an important role in the growth and development of plants. The 1758 bp gene fragment in the intracellular region of SKT1 protein was amplified by PCR using cDNA reverse transcribed from potato tissue culture seedlings. The prokaryotic expression plasmid pET30-SKT1, was constructed and transformed into E.coli BL21 (DE3) expression strain, and the expression was induced by IPTG. SDS-PAGE analysis showed that SKT1 protein mainly existed in the form of inclusion body. In this paper, SKT1 inclusion bodies were dissolved with 6 M guanidine hydrochloride and purified by Ni column. Objective: the SKT1 renaturation rate of protein was more than 40%, and the purity of purified protein was over 95%, Western Blotting. In this paper, the SKT1 gene fragment of Potato Fiurita potassium channel protein was cloned, and the prokaryotic expression and purification of SKT1 protein, which laid a foundation for the further study of the crystal structure and function of the protein SKT1 and its interaction with related proteins.
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S532

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2312148