本文關(guān)鍵詞：金紋細(xì)蛾熱激蛋白HSP90和HSP70基因的克隆與表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《西北農(nóng)林科技大學(xué)》 2015年

金紋細(xì)蛾熱激蛋白HSP90和HSP70基因的克隆與表達(dá)

王冠華  

【摘要】：金紋細(xì)蛾[Phyllonorycter ringoniella(Matsumura)]是蘋果等果樹上一種常見的潛葉性害蟲,具有完全變態(tài)發(fā)育和較強(qiáng)的耐熱性。每年六月在果園開始大量出現(xiàn),一直到十月其種群數(shù)量持續(xù)的增長(zhǎng),即使悶熱的三伏天,果園難熬的高溫高濕環(huán)境,也難阻止該蟲的持續(xù)發(fā)生。探索該蟲耐熱性的機(jī)理,明確其在惡劣天氣下生存與發(fā)展情況,對(duì)其防治管理有一定好處。前人主要從其發(fā)生規(guī)律、空間分布、天敵、綜合防治等一些生態(tài)方面進(jìn)行研究。從分子生物學(xué)角度對(duì)這種耐受性的生化與分子機(jī)制仍未有報(bào)道,從而限制了對(duì)其生態(tài)適應(yīng)性的機(jī)理認(rèn)識(shí)。熱激蛋白(heat shock protein,HSP)是一種抗逆蛋白,在細(xì)胞受到脅迫時(shí)表達(dá)量會(huì)增加,對(duì)細(xì)胞起到一種保護(hù)作用,幫助生物機(jī)體度過不利環(huán)境條件。本試驗(yàn)利用分子克隆技術(shù)獲得金紋細(xì)蛾HSP90和HSP70基因片段,并對(duì)其進(jìn)行鑒定和生物信息學(xué)分析。同時(shí)利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)HSP90和HSP70在金紋細(xì)蛾成蟲不同組織、不同生長(zhǎng)發(fā)育階段以及不同溫度脅迫(高溫)后的表達(dá)。結(jié)果如下:獲得了金紋細(xì)蛾HSP90基因的一條長(zhǎng)度為942bp的片段序列,命名為Prhsp90,登錄號(hào)為KP671600;以及HSP70基因一條長(zhǎng)度為的284bp的cDNA序列,登錄號(hào)為KR075714。序列分析顯示,HSP90基因其對(duì)應(yīng)的氨基酸序列與其他昆蟲的相似性很高,與棉鈴蟲(ADP37710.1)、斜紋夜蛾(ADK55516.1)、煙夜蛾(ADM26742.1)等鱗翅目昆蟲的同源性更是在95%以上;HSP70基因其對(duì)應(yīng)的氨基酸序列與桃小食心蟲(AHN92449.1)、印度谷螟(ACB55606.1)等昆蟲的同源性在87%以上,表明了HSP90和HSP70基因家族的高度保守性。實(shí)時(shí)熒光定量結(jié)果表明,HSP90和HSP70在翅中的相對(duì)表達(dá)量顯著高于頭、胸、腹和足;金紋細(xì)蛾各個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育階段都有HSP90和HSP70表達(dá),但是其成蟲體內(nèi)的表達(dá)顯著高于蛹期和幼蟲期。高溫脅迫下HSP90和HSP70的表達(dá)水平隨著溫度的升高而升高,且經(jīng)過35℃、38℃、41℃、44℃處理后的金紋細(xì)蛾,其體內(nèi)HSP90和HSP70相對(duì)表達(dá)量均具有顯著性提高,且同等溫度脅迫下,HSP70基因增加的倍數(shù)顯著高于HSP90,對(duì)熱激反應(yīng)響應(yīng)更為顯著。研究結(jié)果說明,金紋細(xì)蛾HSP90和HSP70的表達(dá)不僅具有組織特異性,而且在其生長(zhǎng)發(fā)育階段和溫度脅迫中的抗逆行為均可能起著重要的作用。為下一步深入研究金紋細(xì)蛾HSP90和HSP70與生長(zhǎng)發(fā)育和抗逆行為的相互關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S433
【目錄】：

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