本文關鍵詞：番茄SlSWEET11b基因的表達及遺傳轉化　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 番茄 SlSWEET11b 實時定量分析 瞬時表達 遺傳轉化

【摘要】：SWEET蛋白是一種新型的糖轉運蛋白,在糖的輸出轉運過程中起重要作用,近來的研究表明SWEET蛋白在擬南芥、水稻中,在離子的轉運過程、生長和發(fā)育、以及對環(huán)境的適應性方面都起著重要作用。本課題組前期研究表明SlSWEETT11b基因在番茄果實中大量表達,該基因在番茄果實發(fā)育的過程中所發(fā)揮的具體作用還不清楚。本研究通過生物信息學及實時定量PCR方法明確SlSWEE7116基因的特征,并通過構建基因的過表達和沉默載體,采用瞬時表達和穩(wěn)定遺傳轉化的方法對SlSlSWEET11b基因的功能進行初步分析,獲得的主要結果如下:1.根據(jù)番茄數(shù)據(jù)庫獲得SlSWWEET11b基因全長1124bp,由375個氨基酸編碼,跨膜結構分析表明該基因具有7跨膜結構,包含兩個MtN3結構域。與擬南芥SWEET家族的系統(tǒng)進化樹分析表明,該蛋白位于CladeⅡ。根據(jù)該分支其它SWEET蛋白的功能分析,該蛋白可能主要負責蔗糖和果糖的轉運。2.采用實時定量PCR技術,對番茄果實的不同發(fā)育時期表達分析,結果表明SlSWEET11b基因在番茄花后21d表達量達到峰值,隨后下降。在果實成熟過程中,該基因的表達部位也不盡相同,其中在綠果期的膠質(zhì)胎座、轉色期的心室隔壁、紅果期的萼片與果實維管束中表達量較高。3.成功克隆到SlWEET11b基因的全長,采用雙酶切的方法進行過表達載體的構建,同時利用Gateway技術構建沉默表達載體。利用農(nóng)桿菌介導的番茄果實注射方法將構建好的過表達和沉默載體在番茄花后21d的果實中進行瞬時表達,qRT-PCR結果分析表明過表達載體注射番茄果實3d后SlSWEET11b基因表達量明顯高于對照果實;同樣將構建好的沉默載體注射到番茄的果實后SlSWEET11b基因的表達量明顯降低。以上結果表明構建的過表達載體和沉默載體能夠影響SlSWEET11b基因的表達,可以用于進一步的番茄遺傳轉化分析。4.利用Micro-Tom番茄建立了穩(wěn)定的遺傳轉化體系,通過農(nóng)桿菌介導將基因的沉默載體轉化番茄,已獲得SlSWEET11b沉默株系7株,通過PCR鑒定分析后獲得4株顯示陽性的番茄植株,可用于進一步的功能分析。
【學位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S641.2

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 韓佳軒;姜晶;;擬南芥、水稻和番茄SW EET/MtN3/saliva基因家族的分析[J];分子植物育種;2015年03期

2 玄元虎;朱毅勇;胡一兵;;SWEET蛋白家族研究進展[J];中國科學:生命科學;2014年07期

3 賀璽強;徐恒戩;趙汝鳳;;番茄遺傳轉化影響因素及其應用研究進展[J];北方園藝;2013年20期

4 周丹丹;俞嘉寧;;植物細胞中瞬時表達系統(tǒng)的建立及研究進展[J];中國農(nóng)學通報;2013年24期

5 楊春文;唐寧;李正國;;番茄NAM基因的克隆與遺傳轉化[J];熱帶作物學報;2012年08期

6 趙岑;呂立堂;趙德剛;;花青素調(diào)節(jié)基因VlmybA2對番茄遺傳轉化[J];基因組學與應用生物學;2012年03期

7 鄒禮平;高和平;鐘亞琴;;八氫番茄紅素脫氫酶基因超表達載體的構建及表達鑒定[J];湖北農(nóng)業(yè)科學;2012年02期

8 吳英杰;姜波;張巖;李彥邦;賀琳;王玉成;;農(nóng)桿菌介導的煙草瞬時表達試驗條件優(yōu)化[J];東北林業(yè)大學學報;2010年09期

9 高少培;牛向麗;羅笛;常麗娟;喻旭;李欲翔;劉永勝;;利用煙草瞬時表達系統(tǒng)檢測高等植物基因的剪接加工[J];生物化學與生物物理進展;2010年06期

10 陳雙臣;劉愛榮;王鳳華;王菲;周洲;;農(nóng)桿菌介導的番茄Micro-Tom遺傳轉化體系的建立[J];華北農(nóng)學報;2010年02期

相關碩士學位論文 前1條

1 楊X;無核葡萄胚珠發(fā)育相關MADS-Box基因的克隆與功能分析[D];西北農(nóng)林科技大學;2012年

，

本文編號：1323526