本文關鍵詞：基于生物傳感器的金黃色葡萄球菌快速檢測系統的構建及應用的初步研究　出處：《中國人民解放軍醫(yī)學院》2016年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的金黃色葡萄球菌是醫(yī)院臨床感染的常見致病菌,其產生的毒素與侵襲性酶可引起中毒癥狀及嚴重的感染,傳統檢測手段過程繁瑣、需時長、需設備復雜,不適合即時檢測。因此需要一種適用現場分析、實時監(jiān)測,且耗時低的方法,能實現金葡菌的即時檢測,且靈敏度、特異性高。方法本實驗使用集成的全光纖結構免疫熒光生物傳感器,以金黃色葡萄球菌為檢測對象,采用抗體-抗原-熒光物質標記抗體的免疫夾心原理,在經過生物基團修飾的光纖探針上偶聯抗金黃色葡萄球菌特異性抗體,探針捕獲金黃色葡萄球菌后,依次加入一抗、生物素化的二抗和標記有鏈霉親和素的量子點,然后光纖探針接入生物傳感器進行檢測,最終熒光強度的變化反映細菌濃度的高低,針對該生物傳感器應用于金黃色葡萄球菌標準菌株檢測的敏感性、特異性進行評價。并評價其對臨床分離的金黃色葡萄球菌菌株的檢出能力。結果1.經過一系列羥基化、氨基化和醛基化等生物基團修飾的光纖探針能夠實現對抗體的偶聯,隨著抗體濃度的增加,偶聯抗體的數量呈增長趨勢。偶聯有特異性抗體的光纖能夠特異性結合目標物質,而非非特異性吸附。2.顯微鏡下直接細菌計數較平板計數法方便、簡捷,且兩者結果處于一個數量級,能代替平板計數法。偶聯有金黃色葡萄球菌特異性抗體的光纖能特異性捕獲細菌,且捕獲率穩(wěn)定,最高達18.9%。3.采用全光纖結構生物傳感器,利用免疫熒光的檢測方法,選用光穩(wěn)定性好的量子點作為熒光物質,能實現對金黃色葡萄球菌標準菌株的檢測,最低檢出范圍為104cfu/ml,具有很高的靈敏性,且對104-108cfu/ml的金葡菌表現出較好的定量檢測能力。另外選用臨床常見的表皮葡萄球菌、鮑曼不動桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯桿菌等進行特異性檢測,結果均與陰性對照組無明顯差異,表明具有很好的特異性。4.采用上述儀器及方法對臨床分離的金黃色葡萄球菌菌株進行檢測,最低檢測范圍為103/104cfu/ml,提示很高的靈敏性。結論1.光纖探針經過生物基團的修飾能很好地實現與抗體的偶聯；2.偶聯有特異性抗體的光纖探針對細菌具有很高的捕獲率；3.全光纖免疫熒光生物傳感器對金黃色葡萄球菌標準菌株檢測的最低敏感度為104cfu/ml,且與其它臨床常見菌無明顯交叉反應,具有很好的特異性,能同時實現對臨床分離的金黃色葡萄球菌菌株的檢測,最低檢測范圍為103/104cfu/ ml。
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R378.11;TP212.3

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本文編號：1314186