發(fā)布時(shí)間：2017-10-04 20:29

  本文關(guān)鍵詞：日齡、日糧精粗比對(duì)陜北白絨山羊瘤胃微生物區(qū)系影響的研究

  更多相關(guān)文章： 陜北白絨山羊 瘤胃 高通量測(cè)序 植物乳酸桿菌 綠色熒光蛋白 定植

【摘要】：瘤胃微生物和反芻動(dòng)物具有互利互惠的共生關(guān)系,瘤胃微生物能消化利用不能被反芻動(dòng)物直接消化的植物纖維,并轉(zhuǎn)化成肉奶等動(dòng)物產(chǎn)品。優(yōu)化瘤胃微生物區(qū)系可以提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能、維持機(jī)體的健康、減少環(huán)境的污染以及改善動(dòng)物產(chǎn)品質(zhì)量等。另外瘤胃內(nèi)含有豐富的微生物和功能基因資源。因此,瘤胃微生物區(qū)系的研究一直是反芻動(dòng)物研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域。乳酸桿菌具有諸多的益生功能,有些乳酸桿菌已經(jīng)作為益生素添加劑應(yīng)用到飼料生產(chǎn)和乳制品中,乳酸桿菌對(duì)于動(dòng)物體具有許多生理生化的作用,例如維持動(dòng)物健康,調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能,降低血壓,提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能,增強(qiáng)動(dòng)物的代謝能力,調(diào)節(jié)動(dòng)物消化道微生物區(qū)系平衡等。另外,乳酸桿菌也是一種理想的口服疫苗遞送載體。因此弄清乳酸桿菌能否在動(dòng)物胃腸道定植以及其定植的部位具有重要的意義。本研究的目的在于通過(guò)高通量測(cè)序手段研究不同日齡陜北白絨山羊瘤胃微生物區(qū)系的變化,旨在探究瘤胃微生物區(qū)系的建群與自平衡過(guò)程;初步研究在不同精粗比日糧條件下瘤胃微生物的菌群變化規(guī)律,旨在為陜北白絨山羊生產(chǎn)和營(yíng)養(yǎng)調(diào)控提供理論依據(jù);構(gòu)建表達(dá)綠色熒光蛋白的羊源乳酸桿菌,研究其在陜北白絨山羊胃腸道的定植規(guī)律,為建立表達(dá)纖維素酶、生物素等活性物質(zhì)的羊源重組菌奠定理論基礎(chǔ)和技術(shù)方法。主要研究結(jié)果如下:1.80-110日齡陜北白絨山羊瘤胃微生物區(qū)系的研究山羊日齡顯著影響陜北白絨山羊瘤胃微生物區(qū)系。在門的水平上,80、90和100日齡組瘤胃含量最多的兩種菌群為Firmicutes和Synergistete,而110日齡組瘤胃含量最多的兩種菌群為Bacteroidetes和Firmicutes。隨著年齡的增長(zhǎng),Bacteroidetes和Proteobacteria的含量呈顯著增多的趨勢(shì)(P0.05),而Firmicutes(P0.1)和Synergistetes(P0.05)的含量呈顯著減少的趨勢(shì)。在屬的水平上,在80日齡組,BS11_gut_group的含量最多;在90日齡組,Roseburia的含量最多;在100和110日齡組,Prevotella的含量最多。隨著年齡的增長(zhǎng),Prevotella,RC9_gut_group和p2534-18B5_gut_group呈顯著增多的趨勢(shì)(P0.05),而Ruminococcus和Selenomonas呈顯著減少的趨勢(shì)(P0.05)。陜北白絨山羊瘤胃內(nèi)還有大量未鑒定與培養(yǎng)的細(xì)菌菌群,隨著年齡的增長(zhǎng),其含量呈顯著減少的趨勢(shì)(P0.05)。2.不同精粗比日糧對(duì)陜北白絨山羊瘤胃微生物區(qū)系的影響不同精粗比日糧顯著影響陜北白絨山羊瘤胃細(xì)菌菌群組成。在門的水平上,不同精粗比日糧處理組瘤胃含量最多的兩種細(xì)菌菌群均為Bacteroidetes和Firmicutes。隨著日糧精料比例的增加,Actinobacteria和Proteobacteria的含量呈顯著增多的趨勢(shì)(P0.05),而Bacteroidetes的含量呈顯著減少的趨勢(shì)(P0.05)。在屬的水平上,在不同精粗比日糧處理組,Prevotella的含量均最多。隨著日糧精料比例的增加,Prevotella,Selenomonas和Treponema的含量呈顯著增多的趨勢(shì)(P0.05),而Oscillospira和Succiniclasticum的含量呈顯著減少的趨勢(shì)(P0.05)。不同日糧處理組纖維分解菌的含量均低于1%,隨著日糧精料比例的增加,纖維降解菌Ruminococcus和Butyrivibrio的含量呈顯著減少的趨勢(shì)(P0.05)。不同精粗比日糧顯著影響陜北白絨山羊瘤胃真菌菌群組成。在門的水平上,在不同精粗比日糧處理組,Ascomycota的含量均最多。隨著日糧精料比例的增加,Ascomycota,Basidiomycota和Zygomycota的含量呈顯著增多的趨勢(shì)(P0.05),而Chytridiomycota的含量呈顯著減少的趨勢(shì)(P0.05)。在屬的水平上,在C30日糧處理組,Neocallimastix含量最多,而在C50和C70日糧處理組,Candida的含量最多。隨著日糧精料比例的增加,Alternaria,Aspergillus,Neocallimastix,Orpinomyces,Piromyces和Stachybotrys的含量呈顯著減少的趨勢(shì)(P0.05),而Candida,Penicillium和Trichosporon的含量呈顯著增多的趨勢(shì)(P0.05)。3.轉(zhuǎn)gfp基因的羊源乳酸菌及其在山羊胃腸道定植潛力的研究采用MRS篩選培養(yǎng)基從陜北白絨山羊瘤胃分離得到10株乳酸桿菌,通過(guò)16Sr DNA保守序列分析對(duì)其鑒定,鑒定結(jié)果為:6株為植物乳酸桿菌,2株為彎曲乳酸桿菌,1株為干酪乳酸桿菌,1株為未命名乳酸桿菌。利用綠色熒光蛋白(GFP)基因作為目的基因,構(gòu)建表達(dá)載體p LEM415-gfp-p32,電轉(zhuǎn)化到植物乳酸桿菌中,得到表達(dá)熒光蛋白的重組植物乳酸桿菌。陜北白絨山羊口服重組乳酸桿菌后,能在胃腸道的不同部位檢測(cè)到重組菌,隨著口服時(shí)間的延長(zhǎng),在瘤胃中重組乳酸桿菌的濃度呈先減少后增加的變化趨勢(shì)(P0.05),而在十二指腸中重組乳酸桿菌的濃度呈線性減少的變化趨勢(shì)(P0.05)。綜上所述:日齡顯著影響陜北白絨山羊的瘤胃微生物區(qū)系。不同日齡組陜北白絨山羊瘤胃細(xì)菌群落組成不同。隨著年齡的增長(zhǎng),主要的瘤胃細(xì)菌菌群呈規(guī)律性的變化。不同精粗比日糧顯著影響陜北白絨山羊的瘤胃微生物區(qū)系。不同精粗比日糧處理組陜北白絨山羊瘤胃微生物群落組成不同。隨著日糧精料比例的增加,主要的瘤胃微生物菌群呈規(guī)律性的變化。獲得表達(dá)綠色熒光蛋白的羊源重組乳酸桿菌,成功構(gòu)建了羊源乳酸桿菌表達(dá)系統(tǒng)。重組菌在瘤胃內(nèi)具有定植潛力而在十二指腸不具有定植潛力。
【關(guān)鍵詞】：陜北白絨山羊 瘤胃 高通量測(cè)序 植物乳酸桿菌 綠色熒光蛋白 定植
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S827.5
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-13
• 第一章 文獻(xiàn)綜述13-27
• 1.1 瘤胃微生物區(qū)系的研究進(jìn)展13-22
• 1.1.1 瘤胃微生物的主要種類13-14
• 1.1.2 影響瘤胃微生物數(shù)量的因素14-16
• 1.1.3 瘤胃微生物多樣性的研究方法16-22
• 1.2 乳酸桿菌研究進(jìn)展22-25
• 1.2.1 乳酸菌定義和分類22-23
• 1.2.2 乳酸桿菌作為.服疫苗遞送載體的研究進(jìn)展23-24
• 1.2.3 乳酸桿菌基因工程菌的研究進(jìn)展24-25
• 1.3 本研究的目的意義25-27
• 第二章 80-110日齡陜北白絨山羊瘤胃微生物區(qū)系的研究27-42
• 2.1 材料與方法27-30
• 2.1.1 材料27-29
• 2.1.2 方法29-30
• 2.2 結(jié)果與分析30-39
• 2.2.1 樣本細(xì)菌基因組DNA提取30-31
• 2.2.2 16Sr RNA基因V1-V3區(qū)域擴(kuò)增結(jié)果31
• 2.2.3 測(cè)序基本數(shù)據(jù)分析31-33
• 2.2.4 細(xì)菌群落組成分析33-36
• 2.2.5 不同日齡對(duì)陜北白絨山羊瘤胃微生物區(qū)系的影響36-39
• 2.3 討論39-41
• 2.4 小結(jié)41-42
• 第三章 不同精粗比日糧對(duì)陜北白絨山羊瘤胃微生物區(qū)系的影響42-65
• 3.1 材料與方法42-44
• 3.1.1 材料42-43
• 3.1.2 方法43-44
• 3.2 結(jié)果與分析44-62
• 3.2.1 測(cè)序基本數(shù)據(jù)分析44-48
• 3.2.2 微生物群落組成分析48-53
• 3.2.3 不同精粗比日糧對(duì)瘤胃微生物區(qū)系的影響53-62
• 3.3 討論62-64
• 3.4 小結(jié)64-65
• 第四章 轉(zhuǎn)GFP基因的羊源乳酸菌及其在山羊胃腸道定植潛力的研究65-82
• 4.1 材料與方法65-74
• 4.1.1 材料65-66
• 4.1.2 方法66-74
• 4.2 結(jié)果與分析74-79
• 4.2.1 羊源乳酸桿菌的篩選與鑒定74-75
• 4.2.2 重組質(zhì)粒pLEM415-gfp-p32 PCR鑒定75-76
• 4.2.3 重組質(zhì)粒pLEM415-gfp-p32酶切鑒定76
• 4.2.4 重組乳酸桿菌質(zhì)粒PCR鑒定76-77
• 4.2.5 目的基因表達(dá)觀察77-78
• 4.2.6 目的基因表達(dá)穩(wěn)定性觀察78-79
• 4.2.7 羊源重組植物乳桿菌在陜北白絨山羊體內(nèi)定植分布的研究79
• 4.3 討論79-81
• 4.4 小結(jié)81-82
• 第五章 結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)82-83
• 5.1 結(jié)論82
• 5.2 創(chuàng)新點(diǎn)82
• 5.3 還需要深入研究的內(nèi)容82-83
• 參考文獻(xiàn)83-97
• 附錄97-106
• 縮略詞（ABBREVIATION）106-107
• 致謝107-108
• 作者簡(jiǎn)介108

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 何力;郝勃;謝從新;羅曉松;張征;朱祥云;;草魚腸道纖維素酶產(chǎn)生菌主要種類的分離與鑒定[J];應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào);2009年03期

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本文編號(hào)：972693