本文關(guān)鍵詞：鹿茸形態(tài)發(fā)生及生物電對其影響的研究

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【摘要】：器官形態(tài)發(fā)生是器官生長、發(fā)育并維持其形狀的過程,器官形態(tài)發(fā)生信息主要有兩個層面:1)位置信息;2)藍圖信息。由于研究技術(shù)和動物模型的缺乏,器官形態(tài)發(fā)生的研究進展緩慢,尤其是哺乳動物器官形態(tài)發(fā)生的研究。近年來,可再生的低等動物方面研究發(fā)現(xiàn)“形態(tài)發(fā)生由生物電編碼、“形態(tài)發(fā)生信息是由生物電信號組成”,這為哺乳動物器官形態(tài)發(fā)生的研究提供了理論依據(jù)。鹿茸是自然唯一能夠再生的哺乳動物器官,是一個理想的哺乳動物器官研究模型,特別適合用來探索哺乳動物器官的形態(tài)發(fā)生是否也像低等動物那樣由生物電所編碼。研究證明,鹿茸形態(tài)發(fā)生原胚(antlerogenic periosteum,AP)存儲著形態(tài)發(fā)生的位置信息。但當前已有的實驗數(shù)據(jù)無法說明鹿茸形態(tài)發(fā)生藍圖信息的存儲位置。本研究通過對AP進行不同操作的5個實驗,發(fā)現(xiàn):AP左右極性顛倒后,鹿茸的左右極性沒有改變;用液氮將AP中心凍傷后,不完整的AP依然能形成一個具有種屬特異性形狀的鹿茸;雙層AP疊加后,初角茸的形態(tài)發(fā)生受到了干擾;異位移植的AP在多年后,依然能形成每年具有相同形狀的鹿茸;AP組織經(jīng)過一定時間的離體培養(yǎng)后,AP組織依然存活,但生茸能力丟失。在生物電方面,鑒于鈉離子在生物電方面的重要作用和細胞內(nèi)鈉離子濃度對器官再生的影響(低等動物方面的研究結(jié)果),本研究通過Coro Na熒光染料對AP、PP(pedicle periosteum)、FP(facial periosteum)三種細胞的細胞內(nèi)鈉離子進行染色,得到細胞內(nèi)鈉離子的濃度差異是APCPPCFPC;通過對已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的10種鈉離子通道基因在AP、PP、FP三種細胞轉(zhuǎn)錄水平上的檢測,發(fā)現(xiàn)了AP細胞中特異性轉(zhuǎn)錄的Na V1.1基因及候選基因Na V1.5;盡管雄性激素能夠嚴格控制鹿茸的形態(tài)發(fā)生,研究中通過抗雄心激素藥物的應(yīng)用驗證了睪酮對割處再生的“二茬茸”的發(fā)育具有抑制作用,然而通過向培養(yǎng)液中添加睪酮卻發(fā)現(xiàn)睪酮對離體培養(yǎng)的AP、PP、FP三種細胞的細胞內(nèi)鈉離子濃度沒有影響;通過能夠干擾細胞膜電位的ivermectin、MS-222、concanamycin A和SCH-28080四種化學藥物活體干擾AP,使該組織超極化或者去極化,發(fā)現(xiàn)初角茸生長發(fā)育受到抑制。結(jié)論如下:1)鹿茸形態(tài)發(fā)生的藍圖信息存儲于AP中,其中有關(guān)前后極性的信息是分區(qū)域固定存儲的,受到干擾后在發(fā)育過程中可調(diào)節(jié)的能力有限,而左右極性信息則不同,受到干擾后在發(fā)育過程中可調(diào)節(jié)回正常狀態(tài),控制鹿茸生茸能力的信息屬于生理層面的信息;2)AP和PP細胞的生茸能力可能與其內(nèi)高濃度鈉離子水平有關(guān);3)睪酮能夠影響活體鹿茸的形態(tài)發(fā)生,但不能直接影響離體培養(yǎng)的AP和PP細胞內(nèi)鈉離子的濃度。4)鹿茸的形態(tài)發(fā)生需要AP處于特性的生物電極化狀態(tài)。
【關(guān)鍵詞】：鹿茸形態(tài)發(fā)生 藍圖信息 細胞內(nèi)鈉離子濃度 生物電
【學位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S825
【目錄】：

• 摘要6-7
• 英文摘要7-13
• 英文縮略表13-14
• 第一章 引言14-26
• 1.1 器官形態(tài)發(fā)生14-15
• 1.1.1 概述14-15
• 1.1.2 器官形態(tài)發(fā)生研究進展15
• 1.2 生物電編碼器官形態(tài)發(fā)生15-17
• 1.3 生物電技術(shù)方面的研究進展17
• 1.4 器官形態(tài)發(fā)生研究的模型17-24
• 1.4.1 鹿茸形態(tài)發(fā)生來源組織單一，且具有胚胎組織特性17-20
• 1.4.2 鹿茸形態(tài)發(fā)生可以通過AP進行人工調(diào)整20-22
• 1.4.3 鹿茸形態(tài)發(fā)生具有種屬特異性22-23
• 1.4.4 鹿茸形態(tài)發(fā)生受激素調(diào)控23
• 1.4.5 鹿茸是自然界唯一能夠完全再生的哺乳動物器官23-24
• 1.5 本研究的目的及意義24-26
• 第二章 梅花鹿鹿茸形態(tài)發(fā)生藍圖信息的確定26-51
• 2.1 材料和方法26-34
• 2.1.1 實驗動物26
• 2.1.2 試驗器材26-27
• 2.1.3 實驗器材處理和實驗試劑27-28
• 2.1.4 實驗一：AP左右極性顛倒后的鹿茸形態(tài)發(fā)生28-29
• 2.1.5 實驗二：AP液氮冷凍后的鹿茸形態(tài)發(fā)生29-30
• 2.1.6 實驗三：AP疊加后的鹿茸形態(tài)發(fā)生30-31
• 2.1.7 實驗四：AP異位移植的再生茸形態(tài)31-32
• 2.1.8 實驗五：AP離體培養(yǎng)后的活體移植32-34
• 2.2 結(jié)果34-47
• 2.2.1 實驗一：AP左右極性顛倒后的鹿茸形態(tài)發(fā)生34-36
• 2.2.2 實驗二：AP液氮冷凍后的鹿茸形態(tài)發(fā)生36-39
• 2.2.3 實驗三：AP疊加后的鹿茸形態(tài)發(fā)生39-40
• 2.2.4 實驗四：AP異位移植再生茸形態(tài)分析40-44
• 2.2.5 實驗五：AP離體培養(yǎng)后活體移植44-47
• 2.3 討論47-50
• 2.4 小結(jié)50-51
• 第三章 AP干細胞鈉離子濃度測定51-63
• 3.1 材料和方法51-57
• 3.1.1 實驗動物51
• 3.1.2 試驗器材51-52
• 3.1.3 實驗器材處理和實驗試劑52-53
• 3.1.4 AP、PP、FP、PPP、DPP組織取樣及細胞離體培養(yǎng)53-57
• 3.2 結(jié)果與分析57-61
• 3.2.1 骨膜組織取材57-58
• 3.2.2 細胞培養(yǎng)58
• 3.2.3 細胞生長曲線58-59
• 3.2.4 AP、PP、FP細胞內(nèi)鈉離子染色59
• 3.2.5 莫能菌素對細胞內(nèi)鈉離子濃度的影響59-60
• 3.2.6 MS-222對細胞內(nèi)鈉離子濃度的影響60-61
• 3.3 討論61-62
• 3.4 小結(jié)62-63
• 第四章 AP和PP干細胞膜鈉離通道基因篩選63-77
• 4.1 材料和方法64-70
• 4.1.1 細胞株64
• 4.1.2 試驗器材64
• 4.1.3 實驗試劑和實驗器材64-66
• 4.1.4 AP、PPP、DPP、FP細胞RNA提取66-67
• 4.1.5 基因擴增67-70
• 4.2 結(jié)果與分析70-75
• 4.2.1 RNA提取結(jié)果70-71
• 4.2.2 PCR檢測結(jié)果71-75
• 4.2.3 測序結(jié)果75
• 4.3 討論75-76
• 4.4 小結(jié)76-77
• 第五章 性激素對二茬茸及細胞內(nèi)鈉離子濃度的影響77-88
• 5.1 材料和方法77-81
• 5.1.1 實驗動物77
• 5.1.2 試驗器材77-78
• 5.1.3 實驗器材處理和實驗試劑78-79
• 5.1.4 實驗一：抗雄性激素對梅花鹿二茬茸發(fā)育的影響79-80
• 5.1.5 實驗二：睪酮對AP、PP、FP細胞內(nèi)鈉離子濃度的影響80-81
• 5.2 結(jié)果81-86
• 5.2.1 實驗一：抗雄性激素對梅花鹿二茬茸發(fā)育的影響81-85
• 5.2.2 實驗二：睪酮對AP、PP、FP細胞內(nèi)鈉離子濃度的影響85-86
• 5.3 討論86-87
• 5.4 小結(jié)87-88
• 第六章 AP生物電極化狀態(tài)干擾88-95
• 6.1 材料和方法88-92
• 6.1.1 實驗動物88
• 6.1.2 試驗器材88-89
• 6.1.3 實驗器材處理和實驗試劑89-90
• 6.1.4 AP取樣及離體培養(yǎng)90-92
• 6.1.5 AP原位活體移植92
• 6.2 結(jié)果與分析92-93
• 6.3 討論93-94
• 6.4 小結(jié)94-95
• 第七章 結(jié)論95-96
• 參考文獻96-102
• 附錄102-111
• 附錄 1 哺乳動物電壓門控性鈉離子通道類型及其組織分布102-103
• 附錄 2 NaV基因PCR引物設(shè)計（1）103-105
• 附錄 3 NaV基因PCR引物設(shè)計（2）105-107
• 附錄 4 序列測定結(jié)果107-110
• 附錄 5 抗雄性激素試驗血漿睪酮含量測定結(jié)果110-111
• 致謝111-112
• 作者簡歷112-113

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李春義,邴國良,張學文,趙世臻,鄒繼超,范植明;梅花鹿生茸區(qū)骨膜睪酮特異結(jié)合的測定[J];畜牧獸醫(yī)學報;1990年01期

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本文編號：762955