本文關(guān)鍵詞：我國雞群禽白血病病毒的多樣性、致病性及其在免疫選擇壓下準(zhǔn)種演變

  更多相關(guān)文章： 禽白血病病毒 多樣性 致病性 免疫選擇壓 準(zhǔn)種

【摘要】：禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)已發(fā)現(xiàn)有一百多年,是第一個被證實(shí)可誘發(fā)腫瘤的病毒。根據(jù)病毒與宿主細(xì)胞特異性相關(guān)的囊膜蛋白的抗原性,ALV可分為A-J十個亞群,以及新鑒定的K亞群。其中,J亞群禽白血病是由J亞群禽白血病病毒(ALV-J)在雞群中引起的以髓細(xì)胞樣細(xì)胞瘤為主要病理表現(xiàn)的腫瘤病。1988年首次在英國發(fā)現(xiàn)并分離到該病毒,然后迅速傳播到世界其它國家,并很快在全球幾乎所有白羽肉雞中蔓延。ALV-J自上世紀(jì)90年代傳入中國雞群后,其致病性逐漸演變。在最初十年,似乎僅在進(jìn)口的白羽肉用型雞中發(fā)生。但從2004年前后,ALV-J傳入我國蛋用型雞及培育型黃羽肉雞中,且感染率與致腫瘤性日趨上升,最高時全群有30%腫瘤死亡率。特別是在ALV-J感染的蛋雞群中出現(xiàn)了較高比例的體表血管瘤。在2007至2009年期間,ALV-J在我國商品代蛋雞中呈爆發(fā)流行。在我國感染ALV-J的雞群中,除了潛伏期較長(3-6個月)的典型髓細(xì)胞樣細(xì)胞瘤和血管瘤外,還出現(xiàn)了攜帶v-src或v-fps的缺陷型ALV-J誘發(fā)的急性纖維肉瘤。最近五年來,ALV-J已經(jīng)蔓延至我國多種遺傳背景的純地方品系雞群中。本研究對ALV在我國地方品系雞中的流行病學(xué)調(diào)查和致病性方面進(jìn)行了系統(tǒng)研究,并首次利用高通量測序技術(shù)對ALV-J在宿主免疫選擇壓下準(zhǔn)種多樣性的演變進(jìn)行了深入研究。1.我國地方品系雞中禽白血病病毒的流行病學(xué)調(diào)查2011至2014年間,先后在山東、浙江和江蘇各省的22個地方品系雞中采集到270份不同的臨床樣品,并分別對每一個樣品分離和鑒定ALV,共分離鑒定到47株禽白血病病毒,其中4株ALV-A(8.5%),2株ALV-C(4.3%),18株ALV-J(38.3%)和23株ALV-K(48.9%)。進(jìn)化樹分析表明,ALV-J與A、B、C、D和E五個經(jīng)典亞群毒株以及ALV-K亞群分為2個進(jìn)化枝。同時發(fā)現(xiàn),從腫瘤雞中分離到的大多是ALV-J,而從健康雞中分離到的大多是ALV-A、ALV-C和ALV-K。另一方面,在我國地方品種雞中K亞群有如此高的分離率,而從國外引進(jìn)的白羽肉雞和蛋雞中迄今為止還從未分離到K亞群,這一流行病學(xué)現(xiàn)象表明,由本實(shí)驗(yàn)室鑒定的這個新的K亞群可能是一個在我國甚至東亞地區(qū)的地方品系雞群中已長期存在的特有的亞群2.J亞群禽白血病病毒和禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒共感染的致病性研究禽白血病病毒與其它病毒的共感染或多重感染情況非常普遍,為了更全面的了解J亞群禽白血病病毒(ALV-J)和網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(REV)共感染對肉雞和蛋雞的致病作用,本文將該兩種病毒單獨(dú)感染或共感染1日齡商品代肉雞和spf雞,在不同時間對死亡率、體重、免疫器官指數(shù)和對疫苗的抗體反應(yīng)等方面進(jìn)行了系統(tǒng)研究。結(jié)果顯示,無論對商品代肉雞還是spf雞,兩種病毒共感染較單一感染誘發(fā)的死亡率更高、生長遲緩更加顯著(p0.05);共感染組雞的法氏囊和胸腺萎縮程度及對新城疫(nd)和禽流感(h9-ai)疫苗免疫后的抗體反應(yīng)的抑制作用也更強(qiáng)(p0.05)。這些結(jié)果表明alv-j和rev的共感染對商品代肉雞和spf雞都具有顯著的協(xié)同致病作用。3.j亞群禽白血病病毒相關(guān)急性腫瘤的致病性研究為了解alv-j相關(guān)的急性纖維肉瘤與特定的染色體核型之間的生物學(xué)關(guān)系及其致病性方面的特征,本文用肉瘤病料制備了腫瘤細(xì)胞,并嘗試進(jìn)行細(xì)胞系的構(gòu)建,已連續(xù)培養(yǎng)42代,細(xì)胞狀態(tài)良好。對第5代的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行核型分析發(fā)現(xiàn),50個樣品中有29例出現(xiàn)大染色體的多倍體現(xiàn)象,其中21例呈現(xiàn)第7號染色體的三倍體現(xiàn)象,其它的8例分別是第3、4、5(性染色體w)和10號染色體的多倍體現(xiàn)象。另外,有一例同時呈現(xiàn)7號和5號染色體的多倍體。人工造病試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞的第26代培養(yǎng)物的上清液同樣可以誘發(fā)肉瘤。本試驗(yàn)首次對alv-j相關(guān)的急性腫瘤的核型進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)了該alv-j相關(guān)的急性纖維肉瘤的核型具有多態(tài)性。同時,腫瘤細(xì)胞系的構(gòu)建也為進(jìn)一步了解這一帶有腫瘤基因src的缺陷型alv-j的致病性提供了很好的體外研究平臺。4.高通量測序方法對宿主免疫選擇壓下alv-j準(zhǔn)種多樣性的研究為了研究j亞群禽白血病病毒在宿主免疫選擇壓下準(zhǔn)種多樣性的演變,本試驗(yàn)用alv-jnx0101株人工接種spf雞,經(jīng)過36周動物試驗(yàn)觀察,挑選3只持續(xù)病毒血癥且有抗體反應(yīng)雞和3只呈持續(xù)病毒血癥但無抗體反應(yīng)雞,在不同時間點(diǎn)(2w,4w,8w,12w,16w,20w,24w,28w,32w,36w)采集血漿提取病毒rna,利用高通量測序平臺對gp85的兩個高變區(qū)進(jìn)行測序。獲得了迄今為止alv-j準(zhǔn)種方面最大的數(shù)據(jù)集,包含約300萬cleanreads。對高通量測序結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),宿主免疫選擇壓可以顯著提高alv-j的準(zhǔn)種多樣性。同時,選擇壓力也促使優(yōu)勢變異株發(fā)生動態(tài)變化。根據(jù)有抗體雞體內(nèi)前、后期的優(yōu)勢變異株的序列分別構(gòu)建了二個傳染性克隆,并用相應(yīng)時期的血清進(jìn)行病毒交叉中和試驗(yàn)。結(jié)果表明,同一只感染雞在前期產(chǎn)生的抗體和后期產(chǎn)生的抗體表現(xiàn)出顯著不同的抗原特異性,顯示出感染雞體內(nèi)的病毒和宿主抗體反應(yīng)的共演變。在抗體陽性雞血漿中病毒的優(yōu)勢變異株發(fā)生了較多的氨基酸替換,顯示出抗體的選擇壓作用,而在抗體陰性雞,優(yōu)勢變異株也沒有發(fā)生顯著改變。此外,我們在gp85中還發(fā)現(xiàn)了一個新的高變區(qū)(61-68位氨基酸)。據(jù)我們所知,本研究是第一次通過高通量測序在試驗(yàn)動物體內(nèi)研究ALV-J準(zhǔn)種的多樣性和動態(tài)演變。我們的研究揭示了ALV-J與宿主免疫系統(tǒng)之間的相互作用關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：禽白血病病毒 多樣性 致病性 免疫選擇壓 準(zhǔn)種
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S858.31
【目錄】：

• 中文摘要11-14
• Abstract14-17
• 1 前言17-48
• 1.1 禽白血病病毒的研究進(jìn)展17-34
• 1.1.1 禽白血病病毒的分類地位18
• 1.1.2 亞群分類18
• 1.1.3 禽白血病病毒的形態(tài)學(xué)與理化特征18-19
• 1.1.4 禽白血病病毒的基因組結(jié)構(gòu)及蛋白組成19-23
• 1.1.5 ALV-J的來源23-24
• 1.1.6 禽白血病病毒的復(fù)制周期24-26
• 1.1.7 J亞群禽白血病病毒的致瘤機(jī)制26-27
• 1.1.8 我國雞群ALV-J誘發(fā)腫瘤的多樣性及特點(diǎn)27-30
• 1.1.9 我國雞群中ALV-J感染發(fā)生發(fā)展的歷史30-32
• 1.1.10 ALV-J的抗體和病毒血癥存在情況32
• 1.1.11 ALV-J與其它腫瘤性病毒的共感染情況32-33
• 1.1.12 禽白血病的診斷33-34
• 1.2 高通量測序技術(shù)在病毒準(zhǔn)種研究中的應(yīng)用34-44
• 1.2.1 病毒的準(zhǔn)種理論34
• 1.2.2 準(zhǔn)種與變異株的區(qū)別與聯(lián)系34-35
• 1.2.3 研究病毒準(zhǔn)種的方法35-36
• 1.2.4 Sanger常規(guī)測序法36-37
• 1.2.5 主流高通量測序平臺的介紹37-43
• 1.2.6 生物信息學(xué)在高通量測序領(lǐng)域中的應(yīng)用43-44
• 1.3 ALV-J準(zhǔn)種在宿主選擇壓下的研究進(jìn)展44-46
• 1.3.1 體內(nèi)研究ALV-J準(zhǔn)種45
• 1.3.2 體外研究ALV-J準(zhǔn)種45-46
• 1.3.3 高通量測序技術(shù)在研究ALV-J準(zhǔn)種的優(yōu)勢46
• 1.4 本研究的目的及意義46-48
• 2 材料與方法48-63
• 2.1 試驗(yàn)材料48-49
• 2.1.1 毒株和細(xì)胞48
• 2.1.2 試驗(yàn)動物48
• 2.1.3 主要試劑和試劑盒48-49
• 2.1.4 主要儀器49
• 2.2 試驗(yàn)設(shè)計及方法49-63
• 2.2.1 ELISA和IFA檢測ALV-J的比較及我國地方品系雞中ALV-J的流行病學(xué)調(diào)查49-53
• 2.2.2 ALV-J 和 REV 共感染對商品代肉雞致病作用的試驗(yàn)設(shè)計53-54
• 2.2.3 ALV-J和REV共感染對SPF雞的致病作用的試驗(yàn)設(shè)計54-55
• 2.2.4 ALV-J相關(guān)的急性腫瘤的致病性研究55-56
• 2.2.5 高通量測序方法對宿主免疫選擇壓下ALV-J準(zhǔn)種多樣性的研究56-63
• 3 結(jié)果與分析63-101
• 3.1 我國地方品系雞中禽白血病病毒的流行病學(xué)調(diào)查63-71
• 3.1.1 不同抗原檢測試劑盒和間接免疫熒光檢測DF1細(xì)胞培養(yǎng)ALV-J的比較研究63-64
• 3.1.2 我國地方品系雞中ALV的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果64-67
• 3.1.3 一例地方品系雞（黃羽肉雞）的病例分析67-71
• 3.2 ALV-J和REV共感染的致病性研究71-79
• 3.2.1 ALV-J和REV共感染對商品代肉雞的協(xié)同致病作用的研究71-75
• 3.2.2 ALV-J和REV共感染對SPF雞的協(xié)同致病作用的研究75-79
• 3.3 ALV-J相關(guān)的急性纖維肉瘤的致病性研究79-85
• 3.3.1 病毒濾過液接種海蘭褐蛋雞的結(jié)果79-80
• 3.3.2 組織培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征80-81
• 3.3.3 細(xì)胞染色體的數(shù)目81-82
• 3.3.4 染色體核型分析82-84
• 3.3.5 細(xì)胞培養(yǎng)上清液的致腫瘤性研究84-85
• 3.4 宿主免疫選擇壓下J亞群禽白血病病毒的準(zhǔn)種多樣性及其演變85-101
• 3.4.1 不同感染狀態(tài)試驗(yàn)雞的選擇85-87
• 3.4.2 原始數(shù)據(jù)和處理后數(shù)據(jù)87-88
• 3.4.3 高通量測序與常規(guī)測序比較88
• 3.4.4 gp85-A和gp85-B片段的準(zhǔn)種在抗體陽性和陰性雞中的動態(tài)演變88-93
• 3.4.5 血漿中病毒準(zhǔn)種多樣性分析93-95
• 3.4.6 全局選擇壓力分析95
• 3.4.7 單位點(diǎn)氨基酸選擇壓力分析95-99
• 3.4.8 ALV準(zhǔn)種和機(jī)體免疫系統(tǒng)的共演變99-101
• 4 討論101-107
• 4.1 我國地方品系雞中禽白血病病毒的流行病學(xué)調(diào)查101-103
• 4.2 J亞群禽白血病病毒和禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒共感染的致病性研究103-104
• 4.3 J亞群禽白血病病毒相關(guān)急性腫瘤的致病性研究104-105
• 4.4 高通量測序方法對宿主免疫選擇壓下ALV-J準(zhǔn)種多樣性的研究105-107
• 5 結(jié)論107-108
• 6 參考文獻(xiàn)108-123
• 7 致謝123-124
• 8 博士在讀期間發(fā)表的論文124-126

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郭慧君;李中明;李宏梅;柴家前;馬誠泰;王洪進(jìn);崔治中;;3種ELISA試劑盒檢測不同亞型外源性雞白血病病毒的比較[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2010年03期

，

本文編號：554766