本文關(guān)鍵詞：VDR在綿羊睪丸、附睪內(nèi)的表達(dá)及維生素D對(duì)綿羊附睪細(xì)胞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]維生素D是一種類(lèi)固醇激素,1α,25-(OH)2D3是其在動(dòng)物體內(nèi)的活性形式,并在動(dòng)物健康方面發(fā)揮重要作用。維生素D在維生素D受體(VDR)的幫助下發(fā)揮生理功能,例如鈣平衡、骨代謝、細(xì)胞增殖與分化,但是維生素D對(duì)附睪的影響尚不清楚。本研究目的在于探究VDR在睪丸、附睪內(nèi)的表達(dá)情況,以及維生素D是否會(huì)對(duì)附睪細(xì)胞的活力、增殖、凋亡、抗氧化以及分泌功能有影響。[方法]本研究采用PCR、免疫組化、Real-time PCR、Western blotting等技術(shù)手段,檢測(cè)VDR在綿羊附睪頭、體、尾以及睪丸中的表達(dá)情況；通過(guò)對(duì)體外培養(yǎng)的附睪頭、體、尾細(xì)胞進(jìn)行不同濃度的1α,25-(OH)2D3(0 nM,1nM,10nM,100 nM)刺激,采用細(xì)胞計(jì)數(shù)、Real-time PCR、酶聯(lián)免疫反應(yīng)等技術(shù),檢測(cè)1α,25-(OH)2D3對(duì)附睪頭、體、尾細(xì)胞活力和增殖,凋亡相關(guān)基因p53、bax、bcl-2表達(dá),總抗氧化能力、過(guò)氧化氫酶活力、超氧化物歧化酶活力、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活力,唾液酸、α-1,4糖苷酶及乳鐵蛋白三種附睪分泌蛋白的影響。[結(jié)果](1)VDR蛋白存在于綿羊附睪頭、體、尾的上皮細(xì)胞,睪丸間質(zhì)細(xì)胞、精原干細(xì)胞、精母細(xì)胞以及支持細(xì)胞中；綿羊附睪頭、體、尾內(nèi)VDR mRNA與VDR蛋白含量皆顯著高于睪丸；(2)對(duì)體外培養(yǎng)的附睪頭、體、尾細(xì)胞進(jìn)行不同濃度的1α,25-(OH)2D3(0 nM,1 nM, 10 nM,100 nM)刺激后,細(xì)胞活力顯著增強(qiáng)(P0.05/P0.01)；細(xì)胞增殖顯著(P0.05/P0.01)；對(duì)凋亡相關(guān)基因p53、6ax、bcl-2的mRNA表達(dá)均無(wú)顯著影響；對(duì)細(xì)胞的總抗氧化能力、過(guò)氧化氫酶活力、超氧化物歧化酶活力、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活力具有顯著的促進(jìn)作用(P0.05/P0.01)；細(xì)胞分泌的唾液酸、乳鐵蛋白明顯增加(P0.05/P0.01),但對(duì)a-1,4糖苷酶的分泌沒(méi)有顯著影響。[結(jié)論]VDR在綿羊睪丸、附睪中表達(dá),1α,25-(OH)2D3能夠改善附睪細(xì)胞的某些功能,預(yù)示著1α,25-(OH)2D3可能通過(guò)間接作用改善精液品質(zhì)。
【關(guān)鍵詞】：綿羊 附睪 細(xì)胞 1α 25-(OH)_2D_3 VDR
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S826
【目錄】：

• 摘要8-9
• 前言9-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-27
• 1 維生素D研究概況10-12
• 1.1 維生素D研究歷史10
• 1.2 維生素D的代謝10
• 1.3 維生素D需要量10-11
• 1.4 維生素D受體11-12
• 1.5 維生素D應(yīng)答元件(VDRE)12
• 2 維生素D與生殖12-17
• 2.1 VDR在雄性生殖器官內(nèi)的表達(dá)12-15
• 2.2 VDR與維生素D代謝相關(guān)基因與雄性動(dòng)物生殖的關(guān)系15-16
• 2.3 維生素D缺乏與生殖能力16-17
• 3 維生素D代謝的調(diào)節(jié)及下游調(diào)節(jié)因子的推測(cè)17-18
• 4 課題的提出及意義18-20
• 參考文獻(xiàn)20-27
• 第二章 VDR mRNA及VDR蛋白在睪丸、附睪內(nèi)的表達(dá)27-52
• 1 材料與方法27-34
• 1.1 試驗(yàn)材料27-28
• 1.1.1 主要試劑27-28
• 1.1.2 主要儀器28
• 1.2 試驗(yàn)方法28-34
• 1.2.1 樣品采集28-29
• 1.2.2 引物設(shè)計(jì)29
• 1.2.3 總RNA的提取29-30
• 1.2.4 總RNA內(nèi)基因組DNA的去除及cDNA合成30
• 1.2.5 PCR30
• 1.2.6 膠回收30-31
• 1.2.7 連接轉(zhuǎn)化測(cè)序31
• 1.2.8 序列比對(duì)31
• 1.2.9 石蠟切片制作31-32
• 1.2.10 免疫組化32-33
• 1.2.12 標(biāo)曲制作33
• 1.2.13 Western-blotting33
• 1.2.14 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)方法33-34
• 2 試驗(yàn)結(jié)果34-48
• 2.1 VDR mRNA在附睪頭、體、尾、睪丸內(nèi)的表達(dá)34
• 2.2 VDR mRNA測(cè)序結(jié)果34-35
• 2.3 VDR mRNA序列比對(duì)結(jié)果35-39
• 2.4 VDR蛋白在綿羊睪丸內(nèi)的定位39-40
• 2.5 VDR蛋白在綿羊附睪頭內(nèi)的定位40-41
• 2.6 VDR蛋白在綿羊附睪體內(nèi)的定位41-42
• 2.7 VDR蛋白在綿羊附睪尾內(nèi)的定位42-43
• 2.8 附睪頭、體、尾、睪丸內(nèi)VDR mRNA表達(dá)差異43-44
• 2.8.1 目的基因與內(nèi)參基因的溶解曲線43
• 2.8.2 目的基因與內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線43
• 2.8.3 附睪頭、體、尾、睪丸內(nèi)VDR mRNA表達(dá)差異43-44
• 2.9 性成熟前后附睪頭、體、尾、睪丸內(nèi)VDR mRNA表達(dá)差異44-45
• 2.10 附睪頭、體、尾、睪丸內(nèi)VDR蛋白表達(dá)差異45-46
• 2.11 性成熟前后附睪頭、體、尾、睪丸內(nèi)VDR蛋白表達(dá)差異46-48
• 3 討論48-50
• 參考文獻(xiàn)50-52
• 第三章 維生素D對(duì)附睪細(xì)胞活力、增殖及凋亡的影響52-64
• 1 材料與方法52-54
• 1.1 試驗(yàn)材料52
• 1.1.1 主要試劑52
• 1.1.2 主要儀器52
• 1.2 試驗(yàn)方法52-54
• 1.2.1 附睪頭、體、尾細(xì)胞的分離52-53
• 1.2.2 附睪頭、體、尾細(xì)胞的原代及傳代培養(yǎng)53
• 1.2.3 細(xì)胞活力檢測(cè)53
• 1.2.4 細(xì)胞增殖檢測(cè)53
• 1.2.5 附睪細(xì)胞Real-time PCR樣品制備53
• 1.2.6 引物設(shè)計(jì)53-54
• 1.2.7 熒光定量PCR54
• 1.2.8 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析54
• 2 結(jié)果54-61
• 2.1 附睪頭、體、尾細(xì)胞形態(tài)觀察54-56
• 2.2 1α,25-(OH)_2D_3對(duì)附睪細(xì)胞活力的影響56-57
• 2.3 1α,25-(OH)_2D_3對(duì)附睪細(xì)胞增殖的影響57-58
• 2.4 1α,25-(OH)_2D_3對(duì)附睪細(xì)胞p53,bax,bcl-2基因表達(dá)的影響58-61
• 2.4.1 目的基因與內(nèi)參基因的溶解曲線58-59
• 2.4.2 目的基因與內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線59-60
• 2.4.3 1α,25-(OH)_2D_3對(duì)附睪細(xì)胞p53,bax,bcl-2基因表達(dá)的影響60-61
• 3 討論61-63
• 參考文獻(xiàn)63-64
• 第四章 維生素D對(duì)附睪細(xì)胞抗氧化能力的影響64-80
• 1 材料與方法64-70
• 1.1 試驗(yàn)材料64-65
• 1.1.1 主要試劑64
• 1.1.2 主要儀器64-65
• 1.2 試驗(yàn)方法65-70
• 1.2.1 樣品制備65
• 1.2.2 總抗氧化能力檢測(cè)65-66
• 1.2.3 過(guò)氧化氫酶活力檢測(cè)66-67
• 1.2.4 超氧化物歧化酶活力測(cè)定67
• 1.2.5 谷胱甘肽過(guò)氧化物酶測(cè)定67-69
• 1.2.6 谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶測(cè)定69-70
• 1.2.7 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析70
• 2 結(jié)果70-76
• 2.1 1α,25-(OH)_2D_3對(duì)附睪T-AOC的影響70-71
• 2.2 1α,25-(OH)_2D_3對(duì)附睪CAT活力的影響71-72
• 2.3 1α,25-(OH)_2D_3對(duì)附睪頭SOD活力的影響72-73
• 2.4 1α,25-(OH)_2D_3對(duì)附睪GSH-PX活力的影響73-75
• 2.5 1α,25-(OH)_2D_3對(duì)附睪GST活力的影響75-76
• 3 討論76-78
• 參考文獻(xiàn)78-80
• 第五章 維生素D對(duì)附睪細(xì)胞分泌功能的影響80-90
• 1 材料與方法80-82
• 1.1 試驗(yàn)材料80-81
• 1.1.1 主要試劑80
• 1.1.2 主要儀器80-81
• 1.2 試驗(yàn)方法81-82
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)81
• 1.2.2 細(xì)胞上清內(nèi)唾液酸的測(cè)定81
• 1.2.3 綿羊α-1,4糖苷酶的測(cè)定81-82
• 1.2.4 綿羊乳鐵蛋白的測(cè)定82
• 1.2.5 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析82
• 2 結(jié)果82-87
• 2.1 1α,25-(OH)_2D_3對(duì)附睪SA分泌的影響82-83
• 2.2 1α,25-(OH)_2D_3對(duì)附睪頭細(xì)胞分泌α-1,4糖苷酶的影響83-85
• 2.3 1α,25-(OH)_2D_3對(duì)附睪頭乳鐵蛋白分泌的影響85-87
• 3 討論87-89
• 參考文獻(xiàn)89-90
• 全文結(jié)論90-91
• 論文存在的不足和后期研究設(shè)想91-92
• 中英文對(duì)照表92-94
• Abstract94-96
• 致謝96

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本文編號(hào)：436573