本文關(guān)鍵詞：牦牛肉品質(zhì)性狀候選蛋白的篩選與鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：牦牛主要分布在青藏高原及其毗鄰的高山和亞高山地區(qū),是當(dāng)?shù)啬撩裰饕娜馐硜碓�。傳統(tǒng)的飼養(yǎng)方式和特殊的生活環(huán)境使其形成了獨(dú)特的肉品質(zhì)。牦牛肉品質(zhì)形成的分子機(jī)制目前仍不明確。為了更好地解析牦牛肉品質(zhì)形成的遺傳調(diào)控機(jī)制,本研究以成年牦牛和黃牛的背最長肌為研究對(duì)象,利用熒光定量PCR(Q-PCR)、氣象色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-TOF-MS)、同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)(i TRAQ)等方法分析了牦牛和黃牛肌肉中肌纖維組成、代謝物和蛋白質(zhì)的差異,為傳統(tǒng)放牧模式下牦牛肉品質(zhì)的選育和牦牛分子育種提供科學(xué)依據(jù)和理論支撐。1.與黃牛肉相比,牦牛肉的PH45min、a*值和系水力較高,肌內(nèi)脂肪含量較少且嫩度較低。通過分析背最長肌中不同肌纖維類型分子標(biāo)記(My HC I、My HC IIA、My HC IIX和My HC IIB)的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)牦牛背最長肌中I型肌纖維(慢速氧化型)的含量顯著高于黃牛(P0.05),而IIA型(快速氧化型)和IIB型肌纖維(快速酵解型)含量顯著低于黃牛(P0.05)。Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),牦牛和黃牛My HC I m RNA的表達(dá)量與PH45min值、a*和系水力呈正相關(guān),與L*值呈顯著負(fù)相關(guān),My HC IIB m RNA的表達(dá)量與a*值呈顯著負(fù)相關(guān),與L*值呈顯著正相關(guān),My HC IIA m RNA的表達(dá)量與肌內(nèi)脂肪含量呈顯著負(fù)相關(guān)。說明肌纖維組成是影響牦牛和黃牛肉品質(zhì)的重要因素。2.利用GC-TOF-MS技術(shù)檢測了牦牛和黃牛背最長肌中的代謝標(biāo)志物。共篩選到17種濃度有顯著差異的代謝物,其中葡萄糖-6-磷酸、2-羥丁酸、肉豆蔻酸、亞麻酸、油酸、甘露糖基甘油酸、麥芽糖、尿苷、果糖、天冬氨酸和戊二酸在牦牛背最長肌中濃度上調(diào),黃嘌呤核、洋地黃毒糖、葡糖酸、煙酸、核糖酸,γ內(nèi)酯和谷氨酸在黃牛背最長肌中濃度上調(diào)。牦牛背最長肌中濃度上調(diào)的代謝物顯著富集在糖酵解和不飽和脂肪酸合成的代謝通路中,黃牛背最長肌中濃度上調(diào)的代謝物顯著富集在嘌呤代謝和煙酸與煙酰胺代謝通路中。相關(guān)性分析表明牦牛背最長肌中葡萄糖-6-磷酸的含量與PH45min呈顯著正相關(guān),黃牛背最長肌中煙酸含量與肌內(nèi)脂肪含量呈顯著正相關(guān)。這些結(jié)果表明,牦牛和黃牛背最長肌中的碳水化合物和脂類的代謝強(qiáng)度不同,葡萄糖-6-磷酸可作為牦牛肉PH45min的候選代謝標(biāo)志物。3.利用i TRAQ和雙向電泳技術(shù)篩選了牦牛和黃牛背最長肌中的差異蛋白質(zhì)。在牦牛和黃牛背最長肌中鑒定到458種蛋白質(zhì),大部分蛋白質(zhì)等電點(diǎn)在4-10之間,極酸性和極堿性蛋白很少。在牦牛背最長肌中表達(dá)量上調(diào)的蛋白有57種,顯著富集在三羧酸循環(huán)、脂肪酸代謝、氧化磷酸化等通路中,在黃牛背最長肌中表達(dá)量上調(diào)的蛋白有46種,顯著富集在糖酵解/糖異生、丙酮酸代謝等通路中。通過相關(guān)性分析篩選到12種與牦牛肉品質(zhì)性狀相關(guān)的蛋白,其中CAPN1、LDHB、IDH2、HSPB6、CRYAB、SOD1和HADH與嫩度顯著相關(guān),PGM1和ATP5A1與PH45min顯著相關(guān),NDUFS2、MDH1和SOD1與肌內(nèi)脂肪含量顯著相關(guān),HBA與肉a*值顯著相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：肉品質(zhì) 肌纖維類型 代謝組 蛋白質(zhì)組 牦牛
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S823.85
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-12
• 英文縮略表12-13
• 第一章 引言13-22
• 1.1 畜禽肌纖維類型與肉品質(zhì)13-15
• 1.1.1 肌纖維類型的分類13
• 1.1.2 不同類型肌纖維的特征13-14
• 1.1.3 肌纖維類型對(duì)肉品質(zhì)的影響14-15
• 1.2 蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展及其在畜禽肉品質(zhì)研究中的應(yīng)用15-19
• 1.2.1 蛋白質(zhì)組學(xué)概述15
• 1.2.2 蛋白質(zhì)組學(xué)的研究技術(shù)15-16
• 1.2.3 蛋白質(zhì)組學(xué)在肉品質(zhì)研究中的應(yīng)用16-19
• 1.3 代謝組學(xué)的發(fā)展及其在動(dòng)物科學(xué)研究中的應(yīng)用19-21
• 1.3.1 代謝組學(xué)概述19
• 1.3.2 代謝組學(xué)的研究技術(shù)19-20
• 1.3.3 代謝組學(xué)在動(dòng)物科學(xué)中的應(yīng)用20-21
• 1.4 本研究的目的和意義21-22
• 第二章 牦牛和黃牛背最長肌肉品質(zhì)比較和肌纖維組成差異研究22-32
• 2.1 試驗(yàn)材料22
• 2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和樣品采集22
• 2.1.2 主要儀器22
• 2.1.3 主要試劑22
• 2.2 方法22-25
• 2.2.1 性狀測定22-23
• 2.2.2 MyHC mRNA表達(dá)量測定23-24
• 2.2.3 MyHC蛋白含量測定24-25
• 2.3 結(jié)果與分析25-29
• 2.3.1 牦牛與黃牛的胴體性狀和肉品質(zhì)性狀比較25-26
• 2.3.2 牦牛與黃牛背最長肌MyHC mRNA含量與組成比例26-27
• 2.3.3 牦牛與黃牛背最長肌MyHC蛋白含量與組成比例27-28
• 2.3.4 MyHC各亞基mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)量的相關(guān)性28
• 2.3.5 肌肉纖維類型組成與肉質(zhì)性狀的相關(guān)性分析28-29
• 2.4 討論29-30
• 2.4.1 牦牛背最長肌肌纖維組成29
• 2.4.2 MyHC表達(dá)量用于分析肌纖維類型的研究29-30
• 2.4.3 肌纖維類型與肉品質(zhì)的關(guān)系30
• 2.5 小結(jié)30-32
• 第三章 牦牛和黃牛背最長肌組織中差異代謝組學(xué)研究32-42
• 3.1 試驗(yàn)材料32
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和樣品采集32
• 3.1.2 主要儀器32
• 3.1.3 主要試劑32
• 3.2 方法32-33
• 3.2.1 代謝物萃取32
• 3.2.2 代謝物衍生化32-33
• 3.2.3 上機(jī)檢測33
• 3.2.4 數(shù)據(jù)處理與分析33
• 3.3 結(jié)果與分析33-40
• 3.3.1 牦牛和黃牛背最長肌代謝物總離子流圖33-34
• 3.3.2 主成分分析 (PCA)34-35
• 3.3.3 偏最小二乘法判別分析(PLS-DA)及對(duì)模型的驗(yàn)證35
• 3.3.4 正交偏最小二乘法判別分析(OPLS-DA)及對(duì)模型的驗(yàn)證35-36
• 3.3.5 差異代謝物的篩選及鑒定36
• 3.3.6 差異代謝物的KEGG36-37
• 3.3.7 差異代謝物與肉品質(zhì)的相關(guān)性分析37-40
• 3.4 討論40-41
• 3.4.1 GC-MS技術(shù)的分辨率40
• 3.4.2 差異代謝物與肉品質(zhì)的關(guān)系40-41
• 3.5 小結(jié)41-42
• 第四章 牦牛和黃牛背最長肌比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究42-75
• 4.1 試驗(yàn)材料42-43
• 4.2 方法43-48
• 4.2.1 蛋白質(zhì)提取和和濃度測定43
• 4.2.2 iTRAQ標(biāo)記43-44
• 4.2.3 雙向電泳(2-DE)分析44-46
• 4.2.4 生物信息分析46
• 4.2.5 差異蛋白對(duì)應(yīng)基因的mRNA表達(dá)量分析46-47
• 4.2.6 差異蛋白的western blotting驗(yàn)證47-48
• 4.3 結(jié)果與分析48-71
• 4.3.1 肌肉中總蛋白的鑒定信息48-52
• 4.3.2 iTRAQ結(jié)果分析52-58
• 4.3.3 蛋白質(zhì)雙向電泳結(jié)果分析58-63
• 4.3.4 iTRAQ和 2-DE結(jié)果的比較63
• 4.3.5 差異蛋白的GO功能注釋和分類63-66
• 4.3.6 差異蛋白的pathway富集分析66-67
• 4.3.7 差異蛋白在mRNA水平的驗(yàn)證67-68
• 4.3.8 差異蛋白的Western blotting驗(yàn)證68-69
• 4.3.9 差異蛋白與肉品質(zhì)性狀的相關(guān)性分析69-71
• 4.4 討論71-74
• 4.4.1 肌肉蛋白質(zhì)提取71
• 4.4.2 iTRAQ鑒定能力71
• 4.4.3 牦牛肌肉中蛋白質(zhì)的特征71-72
• 4.4.4 雙向電泳和iTRAQ的比較72
• 4.4.5 差異蛋白與肉品質(zhì)的關(guān)系72-74
• 4.5 小結(jié)74-75
• 第五章 全文結(jié)論75-76
• 5.1 全文總結(jié)75
• 5.2 創(chuàng)新點(diǎn)75-76
• 參考文獻(xiàn)76-86
• 附錄86-119
• 致謝119-120
• 作者簡歷120

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 秦文;吳曉云;李天科;閻萍;;FASN基因與牦牛肌內(nèi)脂肪酸組成的相關(guān)性研究[J];華北農(nóng)學(xué)報(bào);2014年03期

  本文關(guān)鍵詞：牦牛肉品質(zhì)性狀候選蛋白的篩選與鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：418737