乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一種經(jīng)蚊蟲傳播的人畜共患傳染病病原。該病毒最早于1871年在日本被發(fā)現(xiàn),對(duì)多種動(dòng)物易感,其中人、馬感染后出現(xiàn)明顯的腦炎癥狀,豬感染后出現(xiàn)懷孕母豬的流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎,公豬睪丸炎,對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成重大危害。JEV靶向中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS),導(dǎo)致致死性腦炎。近年研究表明,JEV在復(fù)制過程中,由于核糖體移碼產(chǎn)生的JEV非結(jié)構(gòu)蛋白NS1’能夠明顯增加病毒的神經(jīng)侵襲力,并在JEV通過血腦屏障(BBB)中發(fā)揮重要作用,但其機(jī)制仍待闡明。作為宿主抗病毒感染的早期防御機(jī)制,Ⅰ型干擾素信號(hào)通路在宿主抗病毒免疫過程中發(fā)揮著重要作用。JEV感染宿主后,通過抑制宿主干擾素的產(chǎn)生及下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),可以使其在外周血中達(dá)到較高的病毒滴度,利于病毒入侵CNS。因此,研究JEV NS1’蛋白與宿主Ⅰ型干擾素之間的關(guān)系,對(duì)揭示該病毒的神經(jīng)侵襲力與致病機(jī)理具有重要科學(xué)意義�；诖�,本論文旨在以JEV NS1’蛋白為研究對(duì)象,探索NS1’蛋白抑制宿主干擾素信號(hào)對(duì)病毒復(fù)制與入侵中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響,具體研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下:1.JEV NS1,缺失導(dǎo)致...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表(Abbrevation)
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 乙型腦炎
        1.1.1 乙型腦炎的流行特征與危害
        1.1.2 乙型腦炎的臨床癥狀與病理變化
        1.1.3 乙型腦炎的防治
    1.2 乙型腦炎病毒
        1.2.1 乙型腦炎病毒編碼蛋白質(zhì)及功能
        1.2.2 NS1及NS1'蛋白質(zhì)
            1.2.2.1 NS1蛋白簡(jiǎn)介
            1.2.2.2 NS1'蛋白簡(jiǎn)介
    1.3 核糖體移碼
        1.3.1 核糖體移碼的簡(jiǎn)介
        1.3.2 -1核糖體移碼的發(fā)生機(jī)制及功能
            1.3.2.1 -1核糖體移碼的發(fā)生機(jī)制
            1.3.2.2 -1核糖體移碼的生物學(xué)功能
        1.3.3 針對(duì)核糖體移碼的抗病毒治療
    1.4 病毒蛋白拮抗Ⅰ型干擾素應(yīng)答機(jī)制
        1.4.1 干擾素簡(jiǎn)介
            1.4.1.1 Ⅰ型干擾素信號(hào)通路
            1.4.1.2 干擾素誘導(dǎo)的效應(yīng)因子
        1.4.2 病毒蛋白抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
        1.4.3 病毒蛋白阻斷Ⅰ型干擾素介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
        1.4.4 黃病毒逃避Ⅰ型干擾素機(jī)制的研究進(jìn)展
第2章 研究目的與意義
第3章 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 毒株、細(xì)胞、菌株與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 載體與質(zhì)粒
        3.1.3 主要藥品及試劑
        3.1.4 主要培養(yǎng)基及其配方
        3.1.5 主要緩沖液及其配方
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
            3.2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            3.2.2.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染(脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法)
            3.2.2.3 細(xì)胞感染JEV
            3.2.2.4 Western blot
            3.2.2.5 間接免疫熒光(IFA)
            3.2.2.6 細(xì)胞總RNA的提取
            3.2.2.7 mRNA水平的檢測(cè)
            3.2.2.8 基因表達(dá)數(shù)據(jù)分析
            3.2.2.9 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
            3.2.2.10 病毒滴度測(cè)定
        3.2.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組與收樣
            3.2.3.1 Balb/c小鼠腦內(nèi)攻毒實(shí)驗(yàn)
            3.2.3.2 小鼠腹腔攻毒實(shí)驗(yàn)
            3.2.3.3 小鼠腦組織與血液樣品處理
        3.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第4章 結(jié)果與分析
    4.1 NS1'缺失導(dǎo)致JEV神經(jīng)侵襲力減弱
        4.1.1 成功構(gòu)建NS1'缺失型病毒
        4.1.2 NS1'缺失不影響JEV神經(jīng)毒力
        4.1.3 NS1'缺失導(dǎo)致JEV神經(jīng)侵襲力減弱
        4.1.4 NS1'蛋白可以增加rG66A毒株的致病力
        4.1.5 NS1'缺失并不影響JEV在Ⅰ型干擾素受體缺失小鼠上的神經(jīng)侵襲力
    4.2 NS1'蛋白抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
        4.2.1 NS1'蛋白缺失上調(diào)JEV誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素及下游ISGs分子
        4.2.2 分泌型NS1'不影響Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
        4.2.3 細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)NS1'蛋白能夠抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
    4.3 NS1'蛋白靶向MAVS抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
        4.3.1 NS1'蛋白抑制IFN-β啟動(dòng)子活性
        4.3.2 NS1'蛋白通過靶向MAVS抑制IFN-β啟動(dòng)子活性
        4.3.3 NS1'蛋白通過調(diào)控miR22來抑制MAVS mRNA的表達(dá)
第5章 討論
    5.1 -1PRF在JEV復(fù)制與免疫逃逸中的作用
    5.2 sNS1'蛋白在JEV復(fù)制或傳播中的作用
    5.3 NS1'蛋白抑制宿主Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的機(jī)制
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：3974891