馬鈴薯卷葉病毒屬(Polerovirus)的病毒侵染很多具有經(jīng)濟重要性的作物,引起嚴重病害。近期的研究表明,在Polerovirus中新發(fā)現(xiàn)的一個ORF所編碼的蛋白P3a是病毒長距離運動所必需的,但其發(fā)揮作用的分子機制尚不清楚。本研究以侵染十字花科作物的蕓薹黃化病毒(Brassica yellows virus,BrYV)為研究對象,通過分子生物學和生物化學手段分析比較野生型與P3a突變體病毒侵染過程的時空差異,結(jié)合P3a及其突變體的生化特性研究,進一步明確P3a突變對系統(tǒng)侵染的影響。研究中我們發(fā)現(xiàn)BrYVP3a缺失表達的突變體病毒AGC(將ORF3a起始的ACG突變?yōu)锳GC)無法系統(tǒng)侵染本生煙。同時,BrYV3406位的胞嘧啶C突變?yōu)槟蜞奏導致P3a第18位脯氨酸P突變?yōu)榱涟彼酟時(突變體命名為BrYV^B18L),BrYV^B18L也無法系統(tǒng)侵染本生煙。并且異源互補實驗表明,瞬時表達的P3a能幫助AGC突變體病毒系統(tǒng)侵染本生煙,但是瞬時表達的P3a^B18L不能。這些實驗說明P3a第18位的脯氨酸是病毒系統(tǒng)侵染所必需的。...

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圖３－３．?ＢｒＹＶ?

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圖４－１．?ＢｒＹＶ三種基因型病毒的侵染性檢測??Ｆｉｇ?４－１．?Ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ?ｔｅｓｔ?ｏｆ?ＢｒＹＶ?ｔｈｒｅｅ?ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ??（八）農(nóng)桿菌浸潤接種?

中國農(nóng)業(yè)大學博士學位論文?第四章ＢｒＹＶ三種基因型病毒Ｐ０生物學活性的初步比較??克隆后，提取質(zhì)粒ｐＴ－ＢｒＢＰＯ和ｐＴ－ＢｒＣＰＯ；質(zhì)粒經(jīng)屈〇丨和卻〇［雙酶切后，與同樣雙酶切處理??的?ｐＧＤ－３Ｆｌａｇ?載體連接，得到?ｐＧＤ－Ｐ０ＢｒＢ－３Ｆｌａｇ?和?ｐＧＤ－Ｐ０ＢｒＣ－....

圖４－５?Ｐ０ＢＭ各突變體對單鏈ＧＦＰ所誘發(fā)的局部沉默抑制表型及分子檢測??Ｆｉｇ?４－５．?Ｓｕｐ?

?Ｈ２２７Ｙ?Ｆ２２８Ｌ???ＷＢＭＳＷＭＲＭ??■ＳＫｌＫＳｌ??ｑ?＊ＧＦＰ＋???Ｐ〇？，Ａ???ｐＣＤ?Ｔ５６Ｌ?Ｖ７０Ｉ?Ｔ１５２Ｉ?ＲＩ５９Ｅ?Ｐ１６３Ｓ?Ｑ１９３Ｅ?Ｓ１９７Ｐ?Ｈ２２＾?Ｆ２２８Ｌ?ＷＴ?ＰＱ８＾??ａｎｄ－?ＧＦＴ??ＣＯＯＤＩ．?．一?，一—?....

圖４－９?ＳｃＹＬＶ?ＰＯ與ＮｂＳＫＰｌ復合物ＧＳＴ親和層析電泳圖??Ｆｉｇ?４－９?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ａｆｔｅｒ?ＧＳＴ－ａｆｆｉｎｉｔｙ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ??

中國農(nóng)業(yè)大學博士學位論文?第四章ＢｒＹＶ三種基因型病毒Ｐ０生物學活性的初步比較??１?２?３?Ｍ?４?５?６?７??ｔｔＨｐ?Ｗｍｍ?ｗｍｍｍ?ｍｍｍｍ?＿＿鑛?ｍｍｎｍ?？?ｇｓｔ－ｐｃ＾??ｗｍｐ?？?Ｈｉｓ－ＮｂＳＫＰｌ??圖４－９?ＳｃＹＬＶ?ＰＯ與ＮｂＳＫＰｌ復合物ＧＳ....

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