發(fā)布時(shí)間：2024-05-11 23:03

　　金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)引起的奶牛乳腺炎目前尚無(wú)有效的商品化疫苗,而有研究發(fā)現(xiàn)相比S.aureus纖維連接素結(jié)合蛋白 B(fibronectin binding protein B,FnBPB)和凝集因子 A(clumping factor A,ClfA)兩種黏附素的重組蛋白FnBPB-ClfA,其IgG Fc段融合重組蛋白Fc-FnBPB-ClfA刺激機(jī)體產(chǎn)生了更高水平的全身及乳腺局部體液免疫應(yīng)答。因此,本研究對(duì)S.aureus黏附素重組蛋白與牛Fc融合后是否通過FcRn的參與提高抗原蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)效率進(jìn)行了研究,隨后使用該融合重組蛋白為抗原的亞單位疫苗進(jìn)行本動(dòng)物的免疫效果評(píng)估,并研發(fā)一種比傳統(tǒng)方法使用簡(jiǎn)便、省時(shí)省力的、可在奶牛接種疫苗前后進(jìn)行免疫效果細(xì)菌學(xué)評(píng)價(jià)的鑒別顯色培養(yǎng)基。1.S.aureus基因工程亞單位疫苗抗原蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)效率的探究:將原代奶牛乳腺上皮細(xì)胞(primary bovine mammary epithelial cells,pbMECs)培養(yǎng)于Transwell至形成完整性較好的細(xì)胞屏障。此時(shí)細(xì)胞屏障上方加入重組蛋白及...

【文章頁(yè)數(shù)】：149 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 奶牛乳腺炎分類
    1.2 奶牛乳腺炎的病原菌分類
        1.2.1 環(huán)境性病原菌
        1.2.2 傳染性病原菌
    1.3 奶牛乳腺炎的流行病學(xué)
        1.3.1 病原菌
        1.3.2 宿主
        1.3.3 傳播媒介
    1.4 奶牛乳腺炎的影響
        1.4.1 社會(huì)影響
        1.4.2 經(jīng)濟(jì)損失
        1.4.3 耐藥菌的傳播
    1.5 奶牛乳腺炎的防控
        1.5.1 外源性病原菌的防控
        1.5.2 臥床、墊料中病原菌的防控
        1.5.3 泌乳期病原菌的防控
        1.5.4 干乳期病原菌的防控
        1.5.5 其他飼養(yǎng)管理的加強(qiáng)
    1.6 奶牛乳腺炎的檢測(cè)方法
        1.6.1 病原菌分離培養(yǎng)、生化鑒定法
        1.6.2 鑒別培養(yǎng)基法
        1.6.3 MALDI-TOF法
        1.6.4 PCR法
        1.6.5 16S rRNA測(cè)序法
        1.6.6 其他基于基因型的鑒定方法
    1.7 奶牛乳腺炎的治療
        1.7.1 抗生素療法
        1.7.2 輔助治療
        1.7.3 加強(qiáng)合理治療的認(rèn)識(shí)
    1.8 奶牛乳腺炎疫苗的研究進(jìn)展
        1.8.1 大腸桿菌疫苗
        1.8.2 乳房鏈球菌疫苗
        1.8.3 S.aureus疫苗
    1.9 研究的目的與意義
2 研究一 S.aureus疫苗抗原蛋白跨乳腺上皮屏障轉(zhuǎn)運(yùn)效率的探究
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞及培養(yǎng)液
        2.1.2 主要試劑和材料
        2.1.3 儀器設(shè)備
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 重組蛋白的制備
        2.2.2 pbMECs體外胞吞轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 重組蛋白的制備
        2.3.2 pbMECs的培養(yǎng)
        2.3.3 pbMECs屏障完整性的檢測(cè)結(jié)果
        2.3.4 pbMECs參與重組蛋白胞吞轉(zhuǎn)運(yùn)
        2.3.5 重組蛋白在pbMECs胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)路徑
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3 研究二 奶牛乳腺炎病原菌的分離鑒定
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 牛群
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 儀器設(shè)備
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 牛奶樣品的采集
        3.2.2 病原菌的分離及初步鑒定
        3.2.3 病原菌的分子生物學(xué)鑒定
    3.3 結(jié)果
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 研究三 奶牛乳腺炎病原菌鑒別顯色培養(yǎng)基的研制
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 菌種
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 儀器設(shè)備
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 奶牛乳腺炎病原菌的分組鑒別
        4.2.2 各組病原菌特異性酶的篩選
        4.2.3 酶的保守性、特異性的驗(yàn)證
        4.2.4 酶顯色底物的合成
        4.2.5 病原菌發(fā)酵產(chǎn)酸的碳源的篩選
        4.2.6 基礎(chǔ)培養(yǎng)基的選擇
        4.2.7 含有顯色底物和/或碳源的培養(yǎng)基顯色效果的評(píng)估
        4.2.8 鑒別顯色培養(yǎng)基成分的優(yōu)化
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 奶牛乳腺炎病原菌鑒別的分組結(jié)果
        4.3.2 特異性酶的篩選結(jié)果
        4.3.3 酶特異性的驗(yàn)證結(jié)果
        4.3.4 酶顯色底物的合成
        4.3.5 病原菌可發(fā)酵產(chǎn)酸的碳源
        4.3.6 含有顯色底物、碳源的培養(yǎng)基的顯色效果
        4.3.7 鑒別顯色培養(yǎng)基成分的優(yōu)化
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
5 研究四 鑒別顯色培養(yǎng)基法分離鑒定奶牛乳腺炎病原菌的評(píng)估
    5.1 試驗(yàn)材料
        5.1.1 牛群
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 儀器設(shè)備
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 牛奶樣品的采集
        5.2.2 培養(yǎng)基的制備
        5.2.3 鑒別顯色培養(yǎng)基分離鑒定病原菌
        5.2.4 傳統(tǒng)的培養(yǎng)基輔以生化方法分離鑒定病原菌
        5.2.5 16S rRNA核酸序列測(cè)定鑒定病原菌
        5.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 乳腺炎牛奶樣品中病原菌在鑒別顯色培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)
        5.3.2 鑒別顯色培養(yǎng)基與傳統(tǒng)分離培養(yǎng)及生化鑒定的一致性檢驗(yàn)
        5.3.3 鑒別顯色培養(yǎng)基與16S rRNA測(cè)序鑒定的一致性檢驗(yàn)
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
6 研究五 S.aureus亞單位疫苗本動(dòng)物免疫試驗(yàn)及免疫效果評(píng)估
    6.1 試驗(yàn)材料
        6.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        6.1.2 主要試劑和材料
        6.1.3 儀器設(shè)備
    6.2 試驗(yàn)方法
        6.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物的篩選與分組
        6.2.2 重組蛋白及疫苗的制備
        6.2.3 鑒別顯色培養(yǎng)基的制備
        6.2.4 免疫程序及樣品采集
        6.2.5 指標(biāo)檢測(cè)
    6.3 試驗(yàn)結(jié)果
        6.3.1 S.aureus亞單位疫苗本動(dòng)物免疫效果增強(qiáng)驗(yàn)證試驗(yàn)
        6.3.2 S.aureus亞單位疫苗免疫效果評(píng)估試驗(yàn)結(jié)果
    6.4 討論
    6.5 小結(jié)
7 全文結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3970502