奶牛乳房炎通常就是指乳腺發(fā)生了炎癥,是由多種因素引起嚴(yán)重程度不同的復(fù)雜疾病。最后會由于環(huán)境、病原體以及宿主的不同而導(dǎo)致不同的后果,因此治療代價較高且不容易治愈。當(dāng)致病菌進(jìn)入到無菌環(huán)境,常常會破壞一些物理屏障如乳頭而引起乳房炎,這就需要及時和適當(dāng)?shù)乃拗鞣烙鶃矸乐辜?xì)菌的滋生避免炎癥的加劇。另一方面,這些傳染性病原體如金黃色葡萄球菌和鏈球菌很容易從感染牛的一個乳區(qū)蔓延到其它乳區(qū)或者是其它的牛。像年齡、泌乳階段和體細(xì)胞評分這些因素都會影響牛感染乳房炎的幾率。不同的病原體會引起不同的乳房炎從而導(dǎo)致乳腺組織產(chǎn)生不同的免疫反應(yīng),因此宿主需要根據(jù)病原體的情況來產(chǎn)生相應(yīng)的應(yīng)答從而保護(hù)機(jī)體免受感染。本試驗以中國荷斯坦奶牛的乳腺組織和乳腺上皮細(xì)胞為研究對象,研究了炎癥信號通路的作用機(jī)制。通過組織學(xué)觀察正常和乳房炎乳腺組織的結(jié)構(gòu)差異,采用基因芯片的方法分析了 TLR4/NF-κB炎癥信號通路在正常與乳房炎乳腺組織中的基因表達(dá)情況;利用體外培養(yǎng)的方法,研究了化學(xué)抑制和siRNA抑制NF-κB基因?qū)θ橄偕掀ぜ?xì)胞中TLR4/NF-κB信號通路關(guān)鍵基因表達(dá)的影響;運用蛋白質(zhì)組iTRAQ技術(shù),篩選激活和抑制p65條件下...

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【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞(Abbreviation)
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 乳房炎的研究進(jìn)展
        1 乳房炎綜述
            1.1 抗生素
            1.2 噬菌體
            1.3 接種疫苗
            1.4 納米粒子
            1.5 細(xì)胞因子
            1.6 天然化合物
    第二章 LPS/TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        1 Toll樣蛋白概述
            1.1 Toll樣蛋白的發(fā)現(xiàn)
            1.2 Toll樣蛋白的生物學(xué)功能
        2 TLR轉(zhuǎn)導(dǎo)信號
            2.1 MyD88-依賴途徑
            2.2 MyD88非依賴途徑
            2.3 TLR4信號通路的負(fù)向調(diào)控
            2.4 NF-κB信號通路
    第三章 蛋白質(zhì)組學(xué)融合下一代基因測序
        1 綜述
        2 蛋白質(zhì)-基因組學(xué):比蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)更準(zhǔn)確
        3 蛋白質(zhì)基因組學(xué)遇到的挑戰(zhàn)以及機(jī)遇
        4 對蛋白質(zhì)基因組學(xué)定量的綜合見解
        5 不同分子層的交互作用
        6 未來的前景
        7 本研究的目的及意義
第二部分 試驗研究
    第四章 荷斯坦奶牛正常與乳房炎乳腺組織的基因表達(dá)譜芯片分析
        1 材料與方法
            1.1 試驗動物及樣品采集
            1.2 RNA提取
            1.3 基因芯片分析
            1.4 RT-qPCR
            1.5 Western Blot
            1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        2 試驗結(jié)果
            2.1 奶牛乳腺組織病理學(xué)檢查結(jié)果
            2.2 基因芯片數(shù)據(jù)的預(yù)處理
            2.3 差異表達(dá)的基因
            2.4 差異基因的GO與KEGG分析
            2.5 芯片結(jié)果驗證
            2.6 免疫印跡驗證芯片結(jié)果
        3 討論
        4 小結(jié)
    第五章 化學(xué)干涉抑制NF-KB基因?qū)LR4/ NF-KB信號通路表達(dá)的影響
        1 材料與方法
            1.1 樣品采集
            1.2 試劑
            1.3 儀器
            1.4 試驗方法
            1.5 統(tǒng)計方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 奶牛乳腺上皮形態(tài)學(xué)觀察
            2.2 Bay11-7082對奶牛乳腺上皮細(xì)胞活力的影響
            2.3 Bay11-7082對炎癥反應(yīng)模型奶牛上皮細(xì)胞活力的影響
            2.4 Bay11-7082對炎癥反應(yīng)模型奶牛上皮細(xì)胞凋亡的影響
            2.5 Bay11-7082對LPS誘導(dǎo)的乳腺上皮細(xì)胞TLR4,NF-κB蛋白表達(dá)的影響
            2.6 Bay11-7082對LPS誘導(dǎo)的乳腺上皮細(xì)胞IL-1β和TNF-α釋放的影響
            2.7 共聚焦顯微鏡觀察Bay11-7082對LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞NF-κB表達(dá)的影響
            2.8 NF-κB基因?qū)LR4/NF-κB信號通路基因表達(dá)水平的影響
        3 討論
        4 小結(jié)
    第六章 基因干涉NF-κB基因?qū)LR4/ NF-κB信號通路表達(dá)的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 試劑
            1.3 儀器
            1.4 試驗方法
            1.5 數(shù)據(jù)處理與分析
        2 結(jié)果
            2.1 NF-κB-siRNA干擾引物篩選與優(yōu)化
            2.2 NF-κB-siRNA對LPS誘導(dǎo)的乳腺上皮細(xì)胞TLR4、NF-κB蛋白表達(dá)的影響
            2.3 NF-κB-siRNA對LPS誘導(dǎo)的乳腺上皮細(xì)胞IL-1β和TNF-α釋放的影響
            2.4 共聚焦顯微鏡觀察NF-κB-siRNA對LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞NF-κB表達(dá)的影響
            2.5 NF-κB-siRNA基因?qū)LR4/NF-κB信號通路基因表達(dá)水平的影響
        3 討論
        4 小結(jié)
    第七章 激活和抑制p65條件下乳腺上皮細(xì)胞差異蛋白質(zhì)的篩選
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 試劑
            1.3 儀器
            1.4 試驗方法
            1.5 數(shù)據(jù)處理與分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 鑒定結(jié)果統(tǒng)計
            2.2 定量蛋白質(zhì)組學(xué)的概述
            2.3 差異表達(dá)的蛋白
            2.4 蛋白質(zhì)功能注釋
        3 討論
        4 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
創(chuàng)新點
附錄
攻讀博士期間發(fā)表及待發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3949418