橡膠樹白粉病是橡膠樹一種重要的葉部病害,它是世界各地植膠區(qū)最重要的病害之一。橡膠樹白粉病的病原菌初次被定名為Oidium heveae,近來一些研究認為應該將其重新分類至Erysiphe、Golovinomyces或Podosphaera。目前還沒有中國區(qū)橡膠樹白粉菌的確切分類及遺傳多樣性的研究,為此,我們開展了對中國橡膠樹主要種植區(qū)橡膠樹白粉菌較為系統(tǒng)的調(diào)查與研究,我們更進一步分析了橡膠樹白粉病葉際微生物群落結構和多樣性,以期為更好理解白粉菌生物進化以及建立白粉病生態(tài)防控新策略提供科學的參考依據(jù)。本研究采用形態(tài)學結合分子鑒定的方式以及篩選DNA條形碼2種方法進行了分類研究,并采用單倍型鑒定、DNA條形碼多基因序列分析、RFLP-PCR和ISSR-PCR分子標記體系對橡膠樹白粉菌進行了遺傳多樣性研究,同時采用高通量測序技術對不同地區(qū)感染白粉菌的橡膠樹葉際微生物群落結構和多樣性進行調(diào)查。具體研究結果如下:1.2013-2017年,在中國主要植膠區(qū)海南、云南和廣東不同生態(tài)區(qū)劃（地區(qū)）的18個采樣點定時采集了 57份橡膠樹白粉菌樣品,利用光學顯微鏡和掃描電子顯微鏡進行顯微形態(tài)觀察、致病性鑒定... 

【文章頁數(shù)】：156 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 橡膠樹白粉病的發(fā)生與為害
        1.1.1 橡膠樹白粉病的為害
        1.1.2 橡膠樹白粉菌的侵染特點及其發(fā)病癥狀
        1.1.3 橡膠樹白粉菌的生物學特性
        1.1.4 橡膠樹白粉病的傳播途徑和發(fā)病條件
        1.1.5 橡膠樹白粉病的防治
    1.2 橡膠樹白粉菌分類學研究現(xiàn)狀
        1.2.1 白粉菌傳統(tǒng)屬級分類概述
        1.2.2 白粉菌新屬級分類系統(tǒng)
        1.2.3 橡膠樹白粉菌的屬級分類概述
        1.2.4 國內(nèi)外白粉菌無性型研究現(xiàn)狀
        1.2.5 核酸序列分析在植物病原真菌中的應用
        1.2.6 核糖體DNA的結構及特點
        1.2.7 rDNA序列分析在白粉菌中的應用
    1.3 病原真菌DNA條形碼的研究
        1.3.1 病原真菌DNA條形碼研究的意義
        1.3.2 條形碼技術與傳統(tǒng)分類鑒定方法的比較
        1.3.3 DNA條形碼的基本流程
        1.3.4 DNA條形碼的標準序列要求
        1.3.5 DNA條形碼技術在病原真菌分類鑒定中的應用
        1.3.6 DNA條形碼技術的前景與展望
    1.4 基于分子標記技術的白粉菌遺傳多樣性概述
        1.4.1 限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)
        1.4.2 隨機擴增多態(tài)性(RAPD)
        1.4.3 擴增片段長度多態(tài)性(AFLP)
        1.4.4 簡單序列重復(SSR)
        1.4.5 簡單序列重復區(qū)間(ISSR)
    1.5 葉際微生物的研究進展
        1.5.1 葉際微生物的生存環(huán)境
        1.5.2 葉際微生物的群落組成
        1.5.3 葉際微生物的生態(tài)功能
        1.5.4 葉際微生物與外界的互作
    1.6 本研究目的及意義
    1.7 技術路線
2 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 供試材料
        2.1.2 供試繁殖寄主
        2.1.3 實驗儀器和設備
        2.1.4 化學試劑和藥品
        2.1.5 供試培養(yǎng)基
    2.2 實驗方法
        2.2.1 橡膠樹白粉菌發(fā)病癥狀及顯微形態(tài)觀察
        2.2.2 橡膠樹白粉菌的致病性鑒定
        2.2.3 橡膠樹白粉菌的分離純化和擴繁
        2.2.4 白粉菌基因組DNA的提取
        2.2.5 DNA純度檢測
        2.2.6 ITS-rDNA及28S-rDNA的PCR擴增
        2.2.7 PCR擴增產(chǎn)物的純化
        2.2.8 PCR純化產(chǎn)物的克隆轉化
        2.2.9 菌液PCR檢測和測序
        2.2.10 序列同源性分析及系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.2.11 單倍型鑒定
        2.2.12 聚類分析與環(huán)境因子的關系
        2.2.13 白粉菌屬DNA條形碼備選基因的引物設計與篩選
        2.2.14 DNA條形碼備選基因的克隆與測序
        2.2.15 DNA條形碼備選基因評價與序列分析
        2.2.16 橡膠樹白粉菌IGS與28S的PCR擴增
        2.2.17 IGS與28S擴增產(chǎn)物的限制性酶切
        2.2.18 IGS-RFLP與28S-RFLP酶切產(chǎn)物檢測
        2.2.19 IGS-RFLP與28S-RFLP數(shù)據(jù)分析
        2.2.20 橡膠樹白粉菌ISSR引物篩選
        2.2.21 橡膠樹白粉菌ISSR反應體系的優(yōu)化
        2.2.22 橡膠樹白粉菌ISSR各引物退火溫度的優(yōu)化
        2.2.23 橡膠樹白粉菌ISSR-PCR反應程序
        2.2.24 橡膠樹白粉菌ISSR數(shù)據(jù)分析
        2.2.25 橡膠樹白粉病葉際微生物DNA提取
        2.2.26 葉際微生物16S與ITS的擴增與測序
        2.2.27 序列數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
3 實驗結果與分析
    3.1 橡膠樹白粉菌的發(fā)病癥狀及顯微形態(tài)觀察
        3.1.1 橡膠樹白粉菌發(fā)病癥狀
        3.1.2 橡膠樹白粉菌顯微形態(tài)觀察
        3.1.3 橡膠樹白粉菌分生孢子大小統(tǒng)計
    3.2 橡膠樹白粉菌的致病性鑒定
    3.3 橡膠樹白粉菌rDNA序列分析
        3.3.1 橡膠樹白粉菌ITS-rDNA序列分析
        3.3.2 橡膠樹白粉菌28S-rDNA序列分析
    3.4 橡膠樹白粉菌分子鑒定
    3.5 橡膠樹白粉菌rDNA序列的同源性與遺傳距離
    3.6 橡膠樹白粉菌rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析
    3.7 rDNA片段的單倍型分析
    3.8 橡膠樹白粉菌聚類分析與環(huán)境因子的關系
    3.9 備選DNA條形碼片段的篩選與評價
    3.10 備選DNA片段的GC含量分析
    3.11 備選DNA片段的條形碼分析
    3.12 備選DNA片段的變異特征
    3.13 備選條形碼片段的鑒定分析
    3.14 備選片段的同源性與遺傳距離
    3.15 備選條形碼片段的系統(tǒng)發(fā)育分析
    3.16 橡膠樹白粉菌多基因系統(tǒng)進化與起源分析
    3.17 RFLP與ISSR分析橡膠樹白粉菌DNA的選取
    3.18 橡膠樹白粉菌IGS與28S的PCR擴增
    3.19 IGS與28S擴增產(chǎn)物的限制性酶切
    3.20 IGS-RFLP與28S-RFLP聚類分析
    3.21 群體基因型劃分與外界環(huán)境的相關性
    3.22 橡膠樹白粉菌ISSR引物的篩選
    3.23 橡膠樹白粉菌ISSR擴增及多態(tài)性分析
    3.24 橡膠樹白粉菌菌株ISSR聚類分析
    3.25 橡膠樹白粉菌菌株主成分分析
    3.26 橡膠樹白粉菌種群的遺傳多樣性
    3.27 橡膠樹白粉菌種群的遺傳分化
    3.28 橡膠樹白粉菌種群的聚類分析
    3.29 橡膠樹白粉病葉際細菌群落基本組成和結構
    3.30 橡膠樹白粉病葉際細菌的多樣性指數(shù)分析
    3.31 不同地區(qū)樣品的PCA分析與NMDS分析
    3.32 不同地區(qū)樣品葉際細菌類群LEfSe分析
    3.33 OTUs聚類與環(huán)境因子相關性分析
    3.34 橡膠樹白粉病葉際真菌群落基本組成和結構
    3.35 橡膠樹白粉病葉際真菌群的多樣性指數(shù)分析
    3.36 不同地區(qū)樣品葉際真菌類群LEfSe分析
    3.37 不同地區(qū)樣品葉際真菌樣本層次聚類樹
    3.38 OTUs聚類與環(huán)境因子相關性分析
4 討論
    4.1 橡膠樹白粉菌的分類鑒定
    4.2 白粉菌屬DNA條形碼篩選與評價
    4.3 橡膠樹白粉菌遺傳多樣性分析
    4.4 橡膠樹白粉病葉際微生物群落結構和多樣性
5 結論
    5.1 本研究主要結論
    5.2 本研究創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3706975