蜱是一種吸血的媒介節(jié)肢動物,在人和動物疾病防治領(lǐng)域中具有重要價值。RH36是上海獸醫(yī)研究所從鐮形扇頭蜱唾液腺分離鑒定的一個具有免疫調(diào)節(jié)作用的蛋白,抑制宿主免疫應(yīng)答反應(yīng);基因干擾實驗和重組蛋白免疫實驗不但發(fā)現(xiàn)RH36影響蜱的叮咬吸血過程,還意外發(fā)現(xiàn)其嚴(yán)重影響蜱的生殖產(chǎn)卵。鑒于蜱的生殖過程在蜱防控中的核心作用,因此,本研究將圍繞RH36影響蜱生殖產(chǎn)卵的作用,探索這一功能的分子機(jī)制,為尋找蜱的防治關(guān)鍵靶標(biāo)提供基礎(chǔ)。一、RH36分子的表達(dá)特征與蜱生殖發(fā)育時序的關(guān)系。分析RH36分子結(jié)構(gòu)并預(yù)測其抗原表位,利用多肽制備RH36抗體。應(yīng)用RT-q PCR和Western Blot方法,研究了RH36分子在蜱吸血過程中的表達(dá)特征,發(fā)現(xiàn)（1）RH36在吸血蜱的唾液腺中表達(dá),在血淋巴、脂肪體和卵巢等器官沒有表達(dá),具有器官特異性表達(dá)的特點。（2）在吸血前和吸血后的不同時間,隨著吸血時間延長,蛋白表達(dá)量逐漸上升,蜱飽血時表達(dá)量達(dá)到高峰,表明RH36在蜱的吸血后期作用特征,與蜱的卵巢發(fā)育時間高度吻合。二、RH36基因沉默對蜱卵巢發(fā)育形態(tài)學(xué)和卵黃發(fā)生的影響。通過RNA干擾實驗比較觀察了RH36基因沉默后蜱的生殖系... 

【文章頁數(shù)】：160 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

安氏革蜱P36蛋白的3D結(jié)構(gòu)預(yù)測圖（MartinOmulindiOyugi，暫未發(fā)表）

大量的卵黃累積，卵殼擴(kuò)大（圖1-2D 至圖 1-2G）。在此發(fā)育階段，精子會滲透到卵母細(xì)胞中，形成兩個細(xì)胞核的卵母細(xì)胞，然后通過生殖管，細(xì)胞核融合發(fā)生兩性生殖，經(jīng)歷減數(shù)分裂，開始產(chǎn)卵。卵黃沉積使卵母細(xì)胞呈琥珀色或者棕色，又稱為卵黃蛋白生成階段的卵母細(xì)胞；卵母細(xì)胞發(fā)育的第四個階段是卵黃蛋白階段的卵母細(xì)胞逐漸擴(kuò)大，發(fā)育成熟，直到卵巢體腔（圖 1-2H）；卵母細(xì)胞發(fā)育的第五個階段是擴(kuò)大到體腔的卵母細(xì)胞排到卵巢腔或者輸卵管，進(jìn)行產(chǎn)卵（圖 1-2I）。早期發(fā)育階段的卵母細(xì)胞到產(chǎn)卵時期的卵母細(xì)胞均在圖 1-2 被描述出來。從卵子發(fā)生及成熟的過程中，我們發(fā)現(xiàn)除了交配行為促進(jìn)卵子發(fā)育成熟外 (Horigane et al., 2010)，卵黃蛋白生成過程占據(jù)主要作用(Boldbaatar et al.,2010b; Clifton and Noriega, 2011; Raikhel and Dhadialla, 1992)，同時研究發(fā)現(xiàn)卵黃蛋白在蜱卵中營養(yǎng)成分的比例占 80 %以上 (Yang et al., 2015)，因此蜱生殖發(fā)育與卵黃蛋白的消化吸收關(guān)系緊密。在卵黃蛋白生成作用發(fā)生之前需要交配和飽血的刺激才能完成 (Alexander S. Raikhel 2002;Donohue et al., 2009; Horigane, et al., 2010)，而且交配后的飽血雌蜱血淋巴和卵巢中蛻皮激素濃度比未交配的飽血雌蜱高，蜱繁殖發(fā)育也需要蛻皮激素的作用，這說明交配是蜱完成退化類固醇所必須的 (Mhashilkar et al., 2016)

圖 1-3 蜱唾液腺蛋白鑒定的四種方法路線圖（Jindrich Chmelar，2016）Fig. 1-3 A schematic of the four methodological pipelines for tick salivary protein identification（Jindrich Chmelar2016）.根據(jù)唾液腺和中腸等組織器官和發(fā)育階段如若蜱和成蜱的情況，進(jìn)行了肩突硬蜱的定量轉(zhuǎn)分析。若蜱和成蜱雌性的中腸和唾液腺在不同吸血時間的兩兩比較揭示了超過 8300 個基因在液腺和中腸的基因表達(dá)差異至少有 10 倍 (Kotsyfakis et al., 2015b)。利用系統(tǒng)生物學(xué)分析肩突硬唾液腺和中腸發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組分析之間存在一些差異 [44]：有 1510 個基因在轉(zhuǎn)錄組和白質(zhì)組中均有表達(dá)，373 種蛋白質(zhì)在唾液腺中比在中腸更豐富，但其中只有 110 個蛋白顯示了相同的組織中有相應(yīng)轉(zhuǎn)錄本的積累。相反地，217 種蛋白在蜱的中腸比在唾液腺中有明顯的上調(diào)但只有 93 種蛋白有類似的轉(zhuǎn)錄模式。作者更詳細(xì)地分析揭示了大多數(shù)過表達(dá)的唾液腺蛋白是泌蛋白或與蛋白質(zhì)修飾機(jī)制連接，而過表達(dá)的中腸蛋白主要是代謝相關(guān)蛋白 (Schwarz, et 2014)。雖然轉(zhuǎn)錄組學(xué)只提供關(guān)于唾液成分的推理（盡管通常是精確的）信息。但是蛋白質(zhì)組學(xué)示了真實的唾液成分，因此這兩種方法是互補的。轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組的實驗設(shè)計在很大程度上取決于存在的問題。因此，我們期望未來的大據(jù)或者系統(tǒng)分析可以集中在特定問題上，這個問題是關(guān)于個別基因、蛋白質(zhì)家族或與蜱蟲生命期有關(guān)的生理現(xiàn)象（如蛻皮和生殖營養(yǎng)一體化等）的具體問題。然而，大部分?jǐn)?shù)據(jù)顯示轉(zhuǎn)錄組

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：3651500