哺乳動物合子基因組激活（Zygotic genome activation,ZGA）過程中合成大量新蛋白,接替母源物質(zhì)調(diào)控早期胚胎發(fā)育。體細(xì)胞核移植（Somatic cell nuclear transfer,SCNT）胚胎發(fā)育過程中,合子基因組激活異常,導(dǎo)致核移植胚胎發(fā)育阻滯在ZGA時期。研究表明長鏈非編碼RNA（Long noncoding RNA,lncRNA）參與調(diào)控合子基因組激活。但山羊胚胎ZGA時期尚不明確,lncRNA保守性較差,同時lncRNA參與調(diào)控核移植胚胎重編程的研究也鮮有報道。因此,本研究以山羊胚胎為試驗材料,探究lncRNA調(diào)控山羊ZGA期核移植胚胎重編程的機(jī)制。本研究主要分為以下四部分:試驗一、山羊ZGA期差異表達(dá)mRNA和lncRNA的研究本試驗旨在確定山羊合子基因組激活期,并篩選鑒定影響山羊合子基因組激活的mRNA和lncRNA。首先,利用體外培養(yǎng)試驗和免疫熒光的方法確定山羊合子基因組激活期。其次,使用單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)分析山羊ZGA過程中mRNA和lncRNA的表達(dá)變化。最后,利用顯微注射siRNA（Smallinterfering RNA）的方法研... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：145 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１小鼠合子基因組激活示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃｓ?ｏｆ?ｍｏｕｓｅ?ｚｙｇｏｔｉｃ?ｇｅｎｏｍｅ?ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ??

?第二部分試驗研宄第四章山羊合子ＺＧＡ期差異表達(dá)ｍＲＮＡ和ＩｎｃＲＮＡ的研宄???２結(jié)果與分析??２．１山羊ＺＧＡ期的確定??體外培養(yǎng)試驗（圖４－１Ａ）發(fā)現(xiàn)，受精后第４８?ｈ，胚胎均處于２細(xì)胞期；在受精后??第６４?ｈ，３４％的胚胎處于８細(xì)胞期，４０％的胚胎處于４細(xì)胞期，２６％的胚胎處于２細(xì)胞??期；在受精后第７２?ｈ，８４％的胚胎處于８細(xì)胞期，５％的胚胎處于桑椹胚期，仍有１１％的??胚胎處于４細(xì)胞期；在受精后第１４４?ｈ，３４％的胚胎處于囊胚期，２８％的胚胎處于桑椹胚??期，仍有３８％的胚胎處于８細(xì)胞期（圖４－１Ｂ），上述結(jié)果表明山羊胚胎發(fā)育阻滯出現(xiàn)在??８細(xì)胞期。??Ａ?Ｂ??．－Ａ．＇，??Ｓ?１００－?ｍ?Ｈ｜?＿％�。畠�??ｔ－ｉｉｉｌｌ??■Ｓ?６〇－圓１?■闕?．一．．??Ｓ?４。．圓?＿?關(guān)?ｉｔ?？?ｂｌａｓｔ。。＃??ｃ?國：?國函?ｍｏｒｕｌａ?．?＇??１２。＿?ｉ?＿?ｉ?＿?靨?ｎ?一、、??＾?學(xué)：—：…ＴＷ－＾?＾�。�??圖４－１山羊胚胎體外發(fā)育??Ｆｉｇｕｒｅ?４－１?Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓｔａｇｅｓ?ｏｆ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ－ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｇｏａｔ?ｅｍｂｒ｝７〇ｓ??（Ａ）山羊胚胎體外發(fā)育情況；（Ｂ）體外培養(yǎng)７天的山羊胚胎（Ｋ）〇ｘ），白色箭頭所示為８細(xì)胞期胚胎。??（Ａ）?Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｉｌｌ?ｖｉｔｒｏ－ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｅｍｂｉｙｏｓ?ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｍｅ?ｐｏｉｎｔ．?（Ｂ）?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ?ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ－ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｅｍｂｒｙｏｓ??ａｔ?ｄａ）

?ＬｎｄＲＮＡ參與調(diào)控山羊合子基因組激活期核移植胚胎重編程的研究???羊胚胎８細(xì)胞期出現(xiàn)合子基因轉(zhuǎn)錄，為合子基因組激活期。??Ａ?Ｄｉｅ－７３?ｄａｙ?？?ＤＡＰＴ?ＣＴＤ?Ｃ?ＤＡＰＩ?ＣＴＤ?Ｍｅｒｇｅ??ＨＨ?ｆｌＩＨ??懂■■?■■■??Ｄ?ＤＡＰ！?ＲＮＡＰｌｉ－Ｓｃｒ２?Ｍｅｒｇｅ?Ｅ?ＤＡＰ！?ＲＮＡＰｉｌ－ＳｅｒＳ?Ｍｅｒｇｅ??■■■?■■■??■■■■ＨＡ??圖４＿２山羊合子基因組激活期確定??Ｆｉｇｕｒｅ?４－２?Ｚｙｇｏｔｉｃ?ｇｅｎｏｍｅ?ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ?ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ?ｉｎ?ｇｏａｔ??（Ａ）?ａ？鵝膏菌素處理的第７．５天胚胎；（Ｂ）?ＣＴＤ在ａ－鵝膏菌素處理的第７．５天胚胎中不表達(dá)；（Ｃ）?ＣＴＤ，（Ｄ）??ＲＮＡＰＩＩ－Ｓｅｒ２，（Ｅ）?ＲＮＡＰＩＩ－Ｓｅｒ５在體外培養(yǎng)的山羊４細(xì)胞和８細(xì)胞期胚胎中表達(dá)情況。??（Ａ）?Ｅｍｂｒ＼ｒｏ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ?ａｒｒｅｓｔｓ?ａｔ?８－ｃｅｌｌ?ｓｔａｇｅ?ｗｈｅｎ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ａｌｐｈａ－ａｍａｎｉｔｉｎ?ｆｏｒ?７．５?ｄａｙｓ?（１００ｘ）．?（Ｂ）??Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ＣＴＤ?ｉｎ?ｔｈｅ?ＮＣ?ａｎｄ?ａｌｐｈａ－ａｍａｎｉｔｉｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｅｍｂｒ＞ｒｏｓ?（１０〇ｘ）．?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ?ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?ｔｈｅ??４－ｃｅｌｌ?ａｎｄ?８－ｃｅｌｌ?ｅｍｂｒ＼ｏｓ?ｓｔａｉｎｅｄ?ｗｉｔｈ?（Ｃ）?Ａｎｔｉ－ＣＴＤ?ａｎｔｉｂｏｄｙ．?（Ｄ）?Ａｎｔｉ－ＲＮＡＰ?ＩＩ－ｓｅｒ２，?ａｎｄ?（Ｅ）?Ａｎｔｉ－Ｒ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]山羊合子基因組激活期基因差異表達(dá)的研究[J]. 趙振華,錢紅娟,周敏敏,王杏龍.  中國畜牧雜志. 2010(03)



本文編號：3522158