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蘋果EPFL分泌蛋白基因?qū)﹂L期干旱脅迫的響應(yīng)及MdEPF2的功能分析

發(fā)布時間:2021-11-01 07:54
  蘋果是世界上最重要的果樹之一,而中國則是最大的蘋果生產(chǎn)及消費國。中國西北黃土高原產(chǎn)區(qū)是中國優(yōu)質(zhì)蘋果生產(chǎn)的最大產(chǎn)區(qū),但是該地區(qū)降水較少,水資源匱乏,且缺少灌溉條件,干旱缺水成為限制該地區(qū)蘋果生產(chǎn)的主要因素。挖掘影響蘋果水分利用效率(WUE)和抗旱性的關(guān)鍵基因,并通過分子生物學(xué)手段培育干旱下具有高WUE的蘋果新品種,一直是蘋果研究的重要方向之一。表皮模式因子(Epidermal Patterning Factor like,EPFL)是陸生植物中廣泛存在的一類分泌蛋白,并且多個物種中其特征成員EPF1和EPF2已被證明能夠調(diào)節(jié)氣孔發(fā)育進(jìn)而影響WUE,但果樹中尚無關(guān)于EPFL蛋白家族的報道。本研究對4個蘋果品種在長期干旱條件下的抗旱相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行了測定,并分析了干旱相關(guān)MdEPFL家族的基因表達(dá)變化。通過對該家族進(jìn)行系統(tǒng)鑒定,從中篩選出一個抗旱調(diào)節(jié)關(guān)鍵基因MdEPF2。在此基礎(chǔ)上,通過轉(zhuǎn)基因和外源處理的方法對MdEPF2在干旱下通過調(diào)節(jié)WUE影響蘋果抗旱性的功能進(jìn)行了詳細(xì)的鑒定。主要結(jié)果如下:1.對‘富士’、‘蜜脆’、‘秦冠’和‘太平洋玫瑰’進(jìn)行長期中度干旱處理,結(jié)果表明與正常澆水植株相比,干... 

【文章來源】:西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】:120 頁

【學(xué)位級別】:博士

【部分圖文】:

蘋果EPFL分泌蛋白基因?qū)﹂L期干旱脅迫的響應(yīng)及MdEPF2的功能分析


圖5-1雙分子熒光互補(bǔ)分析Md EPF2與MdER和MdERL2的相互作用

色譜,多肽


經(jīng)預(yù)測,MdEPF2蛋白的第75-125區(qū)域為MdEPF2的成熟肽區(qū)。我們通過化學(xué)合成獲得了MdEPF2的成熟肽區(qū)mEPF2。隨后mEPF2經(jīng)過透析重折疊,并通過HPLC檢測鑒定合成肽(圖5-2A)和重折疊多肽mEPF2(圖5-2B)。經(jīng)過重折疊的多肽與合成肽相比保留時間減少,合成肽的位置沒有色譜峰(圖5-2B),表明合成肽全部進(jìn)行了重折疊。為了確定MdEPF2蛋白對于蘋果葉片的作用,我們用mEPF2重折疊多肽及熱變性mEPF2外源處理?平邑甜茶‘幼葉,與對照相比,經(jīng)mEPF2重折疊多肽處理葉片的氣孔密度降低(圖5-3)。

密度圖,多肽,氣孔,蘋果


為了確定MdEPF2蛋白對于蘋果葉片的作用,我們用mEPF2重折疊多肽及熱變性mEPF2外源處理?平邑甜茶‘幼葉,與對照相比,經(jīng)mEPF2重折疊多肽處理葉片的氣孔密度降低(圖5-3)。與對照相比,?平邑甜茶‘幼葉經(jīng)外源重折疊多肽mEPF2處理,MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的MdYODA(MdMAPKKK)、MdMEK(MdMAPKK)、MdMAPK3、MdMAPK6-1、MdMAPK6-2的表達(dá)量均提高。對于調(diào)節(jié)氣孔發(fā)育的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子MdSPCH的表達(dá)量略有降低,MdMUTE和MdFAMA的表達(dá)量變化不明顯(圖5-4)。

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
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博士論文
[1]蘋果屬資源對蘋果褐斑病的抗性機(jī)理及抗性誘導(dǎo)研究[D]. 殷麗華.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2013
[2]蘋果屬植物種間水分利用效率的差異及其機(jī)理研究[D]. 馬小衛(wèi).西北農(nóng)林科技大學(xué) 2009



本文編號:3469797

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