由于學習期間獲得國家留學基金委的資助,博士論文的相關研究分別在中國農業(yè)科學院農業(yè)資源與農業(yè)區(qū)劃研究所和佛羅里達大學微生物學和細胞生物學系進行,故研究內容分為兩個部分。第一部分:兩種側耳高溫脅迫導致的細胞凋亡研究。我國食用菌產業(yè)經過30多年高速發(fā)展,在種植業(yè)中,成為位居糧、菜、果、油之后的第五大作物,2013年產量已超過3100萬噸、產值超過1700億元。其中平菇產量位居第二,超過總產的18%,而糙皮側耳和肺形側耳是平菇的主要栽培種。但長期以來我國平菇的生產大多采用農業(yè)方式的粗放栽培,受自然環(huán)境條件影響較大。特別是在生長中常遭遇到高溫天氣。高溫（>38oC）是影響食用菌生長發(fā)育的重要環(huán)境因子,但高溫脅迫下相關響應機制的研究報道很少。為了探究食用菌發(fā)菌期高溫的危害機理,以側耳屬（Pleurotus）的兩個主要栽培栽培種P.ostreatus和P.pulmonarius的兩個生產品種CCMSSC00358（特白一號）和CCMSSC00493（鳳尾菇）為實驗材料,在高溫脅迫下（42℃,0.5h-4h）,檢測了細胞核濃縮情況,細胞活性氧水平和染色體DNA的片段化,以探討菌絲細胞凋亡的發(fā)生情... 

【文章來源】：中國農業(yè)科學院北京市

【文章頁數】：105 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 細胞凋亡概述
    1.2 絲狀真菌細胞凋亡的研究方法
        1.2.1 細胞核濃縮的檢測
        1.2.2 活性氧積累的檢測
        1.2.3 DNA斷裂的檢測
    1.3 絲狀真菌細胞凋亡的研究進展
        1.3.1 化合物誘導對絲狀真菌細胞凋亡的研究進展
        1.3.2 環(huán)境脅迫對絲狀真菌細胞凋亡的研究進展
    1.4 高溫脅迫下食用菌的研究進展
    1.5 轉錄因子概述
    1.6 轉錄因子的研究方法
        1.6.1 凝膠遷移實驗
        1.6.2 DNase I足跡法
        1.6.3 染色質免疫沉淀
        1.6.4 電化學阻抗譜
    1.7 球孢白僵菌轉錄因子研究進展
        1.7.1 轉錄因子MSN2研究進展
        1.7.2 轉錄輔因子MBF1研究進展
        1.7.3 通用轉錄因子TBP研究進展
    1.8 本研究的內容、目的和意義
第二章 兩種側耳高溫脅迫導致的細胞凋亡研究
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗菌株及培養(yǎng)基
        2.1.2 試驗試劑
    2.2 試驗儀器
    2.3 試驗方法
        2.3.1 菌絲培養(yǎng)
        2.3.2 高溫脅迫處理
        2.3.3 細胞核濃縮檢測
        2.3.4 活性氧積累檢測
        2.3.5 DNA片段化檢測
        2.3.6 外源添加劑對真菌細胞凋亡的影響
        2.3.7 統(tǒng)計分析
    2.4 結果與分析
        2.4.1 高溫脅迫下細胞核的變化
        2.4.2 高溫脅迫下活性氧的變化
        2.4.3 高溫脅迫下DNA片段化的變化
    2.5 討論
第三章 球孢白僵菌轉錄因子Bb MSN2與靶基因啟動子相互作用的研究
    3.1 試驗材料
        3.1.1 試驗菌株及培養(yǎng)基
        3.1.2 試驗載體
        3.1.3 試驗試劑
    3.2 試驗儀器
    3.3 試驗方法
        3.3.1 真菌培養(yǎng)
        3.3.2 Bb MSN2表達載體的構建
        3.3.3 Bb MSN2蛋白的外源表達和純化
        3.3.4 靶基因啟動子的擴增和特異探針的合成
        3.3.5 凝膠遷移實驗
        3.3.6 數據分析
    3.4 結果與分析
        3.4.1 p ET28GST-Bb MSN2表達載體的構建
        3.4.2 Bb MSN2蛋白的生物信息學分析
        3.4.3 Bb MSN2蛋白的外源表達和純化
        3.4.4 Bb MSN2蛋白結合位點的分析
        3.4.5 靶基因啟動子序列分析
        3.4.6 Bb MSN2蛋白與核酸的相互作用
    3.5 討論
第四章 球孢白僵菌Bb TBP與TATA-box及Bb MBF1相互作用的研究
    4.1 試驗材料
        4.1.1 試驗菌株及培養(yǎng)基
        4.1.2 試驗載體
        4.1.3 試驗試劑
    4.2 試驗儀器
    4.3 試驗方法
        4.3.1 真菌培養(yǎng)
        4.3.2 Bb TBP和Bb MBF1表達載體的構建
        4.3.3 Bb TBP和Bb MBF1蛋白的外源表達和純化
        4.3.4 TATA-box序列的分析和合成
        4.3.5 凝膠遷移實驗
        4.3.6 電化學阻抗譜分析
    4.4 結果與分析
        4.4.1 p ET 28a-Bb TBP和p ET 28a-Bb MBF1表達載體的構建
        4.4.2 Bb TBP和Bb MBF1蛋白的生物信息學分析
        4.4.3 Bb TBP和Bb MBF1蛋白的表達及純化
        4.4.4 Bb TBP結合位點的序列分析
        4.4.5 Bb TBP與TATA box探針的相互作用
        4.4.6 Bb TBP與Bb MBF1蛋白間的相互作用
    4.5 討論
第五章 結論
    5.1 本研究的主要結論
    5.2 創(chuàng)新點
    5.3 有待進一步研究的問題
參考文獻
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]肺形側耳高溫后恢復期間海藻糖代謝途徑研究[J]. 劉秀明,黃晨陽,陳強,鄔向麗,張金霞.  中國農業(yè)科學. 2013(24)
[2]外源海藻糖對高溫脅迫下肺形側耳氧化損傷的緩解效應[J]. 劉秀明,黃晨陽,陳強,鄔向麗,張金霞.  園藝學報. 2013(08)



本文編號：3418279